人子宮內(nèi)膜的體外構(gòu)建及Ang-(1-7)和AngⅡ?qū)ψ訉m內(nèi)膜細(xì)胞和子宮內(nèi)膜組織的影響.pdf

1、目的:宮腔粘連或纖維化是指因不規(guī)范宮腔操作、人工流產(chǎn)術(shù)、繼發(fā)感染等原因所造成的子宮腔部分或全部粘連而引起的一組癥候群。其發(fā)生率為20-30％。臨床上常出現(xiàn)月經(jīng)減少、閉經(jīng)和不育。這一不良結(jié)局主要體現(xiàn)在不孕不育的人群逐漸增加。即使采取手術(shù)治療，粘連再形成率高達(dá)50％。隨著輔助生殖技術(shù)的發(fā)展，許多相關(guān)問題得到解決，但在輔助助孕妊娠失敗病例中有相當(dāng)一部分由宮腔粘連或纖維化導(dǎo)致。
　　目前對于子宮粘連或纖維化的機(jī)制還不清楚，國內(nèi)外尚缺少有效

2、的診斷與防治手段。因此，急需相關(guān)基礎(chǔ)與臨床研究，闡明子宮內(nèi)膜粘連或纖維化的機(jī)制，從而研發(fā)新的診治技術(shù)，預(yù)防并進(jìn)行有效治療。
　　本研究探討以人子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞作為種子細(xì)胞，以Ⅰ型液態(tài)鼠尾膠原和Matrigel膠為生物支架能否在體外按自然狀態(tài)的子宮內(nèi)膜結(jié)構(gòu)構(gòu)建出具有三維立體結(jié)構(gòu)的組織工程化子宮內(nèi)膜，并且對其進(jìn)行形態(tài)學(xué)與免疫組織化學(xué)分析;從而將為子宮內(nèi)膜的研究提供有益的實驗?zāi)Ｐ?，并為最終構(gòu)建具有完整結(jié)構(gòu)的組織工程化子宮提供實

3、驗依據(jù)。在細(xì)胞、基因和蛋白水平，探討血管緊張素-(1-7)[Ang-(1-7)]和血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)對人子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞數(shù)目和活性的影響，并且探討Ang-(1-7)和AngⅡ?qū)υ隗w外構(gòu)建的人子宮內(nèi)膜組織的影響，為子宮內(nèi)膜粘連或纖維化的防治提供新的思路和理論依據(jù)。
　　方法:
　　1、人子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞(EECs)和基質(zhì)細(xì)胞(ESCs)的分離、純化、培養(yǎng)及鑒定
　　采用酶消化和離心法在體外分離、純化和培養(yǎng)

4、原代人子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞，用4％臺盼藍(lán)染色進(jìn)行活細(xì)胞計數(shù)和觀察細(xì)胞活力;采用光學(xué)顯微鏡、倒置顯微鏡和H&E染色觀察子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)和結(jié)構(gòu);用免疫細(xì)胞化學(xué)方法鑒定子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞;用MTT法觀察雌二醇(E2)和孕酮(P4)對上皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞增殖的影響。
　　2、體外子宮內(nèi)膜三維立體結(jié)構(gòu)的構(gòu)建，培養(yǎng)及鑒定
　　制備Ⅰ型液態(tài)鼠尾膠原，以Ⅰ型液態(tài)鼠尾膠原和Matrigel為生物支架，將分離出的子宮

5、內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)傳代后作為種子細(xì)胞，接種在膠原中形成基質(zhì)細(xì)胞-膠原復(fù)合物，等其凝固后，再把Matrigel覆蓋在復(fù)合物上，把上皮細(xì)胞接種在Matrigel上，在體外按自然子宮內(nèi)膜的結(jié)構(gòu)構(gòu)建出具有三維立體結(jié)構(gòu)的組織工程化子宮內(nèi)膜，并且對其進(jìn)行形態(tài)學(xué)與免疫組織化學(xué)分析。
　　3、血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)對人EECs增殖的影響
　　體外培養(yǎng)正常人EECs，采用MTT法觀察不同濃度(10-6 mol/L、10-7mol/L、10-8

6、 mol/L、10-9 mol/L) AngⅡ作用EECs24 h、48 h和72 h后對其增殖的影響。
　　4、血管緊張素-(1-7)[Ang-(1-7)]對AngⅡ誘導(dǎo)的EECs增殖的影響
　　觀察不同濃度(10-5 mol/L、10-6 mol/L、10-7 mol/L、10-8 mol/L) Ang-(1-7)和AngⅡ(10-6 mol/L)對EECs作用24 h、48 h和72 h后增殖的影響。
　　5、A

7、ng-(1-7)和AngⅡ?qū)Φ淖訉m內(nèi)膜上皮細(xì)胞活性的影響
　　體外培養(yǎng)正常人EECs，將細(xì)胞分為對照組、AngⅡ(10-6 mol/L)組，Ang-(1-7)(10-5 mol/L)組和AngⅡ+Ang-(1-7)組。繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞72 h后，用免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測EECs中的α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)和上皮性鈣粘附素(E-cadherin)的表達(dá)水平;用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測上清液中細(xì)胞外基質(zhì)成分Ⅰ型膠原(Co

8、lⅠ)和纖粘連蛋白(FN)的含量;用western blot檢測EECs中α-SMA和E-cadherin的表達(dá)水平;Real time PCR檢測α-SMA mRNA、E-cadherin mRNA、FN mRNA和ColⅠ mRNA的表達(dá)水平。
　　6、AngⅡ?qū)SCs增殖的影響
　　體外培養(yǎng)正常人ESCs，采用MTT法觀察不同濃度(10-6 mol/L、10-7mol/L、10-8 mol/L、10-9 mol/L)

9、 AngⅡ作用子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞24 h、48 h和72 h后對其增殖的影響。
　　7、Ang-(1-7)對AngⅡ誘導(dǎo)的ESCs增殖的影響
　　觀察不同濃度(10-5 mol/L、10-6 mol/L、10-7 mol/L、10-8 mol/L) Ang-(1-7)和AngⅡ(10-6 mol/L)作用ESCs24 h、48 h和72 h后對其增殖的影響。
　　8、Ang-(1-7)和AngⅡ?qū)Φ腅SCs活性的影響

10、r>　　體外培養(yǎng)正常人ESCs，將細(xì)胞分為對照組、AngⅡ(10-6 mol/L)組，Ang-(1-7)(10-5 mol/L)組和AngⅡ+Ang-(1-7)組。繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞72 h后，用免疫細(xì)胞化學(xué)染色法和western blot檢測ESCs活化標(biāo)志物α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)、轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)和胰島素樣生長因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)的表達(dá)水平;用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測上清液中TGF-β1、IGF-Ⅰ、C

11、olⅠ和FN的含量;Rime Time PCR檢測ESCs中ColⅠmRNA、FNrnRNA、α-SMA mRNA、TGF-β1 mRNA和IGF-Ⅰ mRNA的表達(dá)水平。
　　9、Ang-(1-7)和AngⅡ?qū)Φ淖訉m內(nèi)膜組織活性的影響
　　在體外構(gòu)建子宮內(nèi)膜的三維立體結(jié)構(gòu)模型，將構(gòu)建的子宮內(nèi)膜分為四組:對照組、Ang-(1-7)組、AngⅡ組和Ang-(1-7)+AngⅡ組，用western blot檢測子宮內(nèi)膜的α-SM

12、A、TGF-β1和IGF-Ⅰ蛋白表達(dá)水平;Real Time PCR檢測子宮內(nèi)的α-SMA mRNA、TGF-β1 mRNA和IGF-Ⅰ mRNA的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1、子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞及基質(zhì)細(xì)胞的分離、培養(yǎng)與鑒定
　　用離心法獲得的的子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞在倒置顯微鏡下觀察呈團(tuán)狀或葡萄串狀，其細(xì)胞純度＞90％。4％的臺盼藍(lán)溶液檢測細(xì)胞存活率達(dá)92％～96％，24 h后已貼壁生長，3天后細(xì)胞長成旋渦狀排列的致密單層

13、細(xì)胞集落，單個細(xì)胞形態(tài)呈類圓形或橢圓形，細(xì)胞核大而圓，一個，多位于細(xì)胞的中央，核仁明顯。用DMEM/F12和10％的胎牛血清培養(yǎng)子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞不能傳代。
　　H&E染色并在光學(xué)顯微鏡下觀察:上皮細(xì)胞形態(tài)呈類圓型或蝌蚪型，細(xì)胞核大而圓，一個，多位于細(xì)胞的中央，核仁明顯，染色質(zhì)疏松淺染;細(xì)胞質(zhì)相對較多，胞質(zhì)呈顆粒狀，嗜酸性。免疫細(xì)胞化學(xué)檢測結(jié)果顯示:可見上皮細(xì)胞胞質(zhì)Cytokeratin染色陽性，呈棕黃色，細(xì)胞核為陰性，不顯色，而v

14、imentin染色陰性。
　　用離心法獲得的子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞在倒置顯微鏡下觀察呈單個分散的細(xì)胞，其細(xì)胞純度＞92％。4％的臺盼藍(lán)溶液檢測細(xì)胞存活率達(dá)95％～98％，將分離的基質(zhì)細(xì)胞接種在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，2h已開始貼壁，12h已開始生長，細(xì)胞體向兩端突起，似出芽。細(xì)胞生長約3～4天即聚合成片。用DMEM/F12和10％的胎牛血清培養(yǎng)子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞可以傳3～4代，培養(yǎng)早期的細(xì)胞光鏡下可見兩種形態(tài)，多數(shù)為梭形，另一種為多邊形或星形，細(xì)胞

15、核大呈橢圓形，一個，多位于細(xì)胞的中央，核仁明顯。
　　H&E染色并在光學(xué)顯微鏡下觀察:基質(zhì)細(xì)胞形態(tài)呈梭形、多邊形或星形，細(xì)胞核大呈橢圓形，一個，多位于細(xì)胞的中央，核仁明顯，染色質(zhì)疏松淺染;細(xì)胞質(zhì)相對較多，胞質(zhì)呈嗜酸性，染為粉紅色。
　　免疫細(xì)胞化學(xué)檢測:可見基質(zhì)細(xì)胞胞質(zhì)vimentin染色陽性，呈棕黃色，細(xì)胞核為陰性，不顯色，而Cytokeratin染色陰性。
　　MTT法觀察雌二醇(E2)和孕酮(P4)對上皮細(xì)胞和基

16、質(zhì)細(xì)胞增殖的影響:E2和P4單獨作用并不能顯著增加子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞增殖(P＞0.05），但100nmol/L的E2和10nmol/L的P4對子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞的增殖作用顯著(P＜0.05），實驗的研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)上皮細(xì)胞與少量基質(zhì)細(xì)胞混合培養(yǎng)在100nmol/L的E2和10nmol/L的P4的環(huán)境下時，上皮細(xì)胞能夠很好地傳至5～6代，而100nmol/L的P4對子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞的增殖作用顯著(P＜0.05）。
　　2、體外構(gòu)建子宮內(nèi)膜三

17、維立體結(jié)構(gòu)的培養(yǎng)及鑒定
　　構(gòu)建具有兩層結(jié)構(gòu)的組織工程化子宮內(nèi)膜在DMEM/F12培養(yǎng)液中培養(yǎng)第三天時，片層開始收縮，并隨時間的延長，收縮逐漸明顯。四根玻璃柱對片層起到靜態(tài)拉伸作用，同時還能防止過度收縮導(dǎo)致片層變厚。
　　組織工程化子宮內(nèi)膜經(jīng)H&E染色后顯示:對培養(yǎng)14天的組織工程化子宮內(nèi)膜取材，組織學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過14天的培養(yǎng)，子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞狀態(tài)良好，上皮層細(xì)胞在液態(tài)膠原材料表面積聚生長，細(xì)胞近圓形，體積比基質(zhì)

18、細(xì)胞略大，細(xì)胞與細(xì)胞之間緊密相連，有些部位上皮呈扁平狀，但也有很多部位的上皮呈現(xiàn)正常子宮內(nèi)膜所特有的極化柱狀形態(tài)，這為其發(fā)揮相應(yīng)的功能打下了結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。
　　組織工程化子宮內(nèi)膜免疫組化鑒定結(jié)果顯示:上皮層呈上皮角蛋白抗體(Cytokeratin)陽性，而基質(zhì)層中的基質(zhì)細(xì)胞呈Cytokeratin陰性。基質(zhì)層中的基質(zhì)細(xì)胞呈波形蛋白抗體(vimentin)陽性，而上皮層呈vimentin陰性。
　　3、AngⅡ?qū)ψ訉m內(nèi)膜上皮細(xì)胞增

19、殖的影響
　　子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)24 h，48 h和72 h后，紫色結(jié)晶通過測定550nm每個培養(yǎng)孔的吸光度值(A)觀察子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞數(shù)目變化情況:AngⅡ可誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞數(shù)目明顯增加(P＜0.05），且AngⅡ有呈劑量和時間依賴性地促進(jìn)子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞增殖作用;但24 h與對照組比較，無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05），48 h，72 h時，AngⅡ組細(xì)胞數(shù)目與對照組比較明顯增加（P＜0.05）。
　　4、Ang-(1

20、-7)對AngⅡ誘導(dǎo)的子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞增殖的影響
　　子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)24 h，48 h和72 h后，紫色結(jié)晶通過測定550 nm每個培養(yǎng)孔的吸光度值(A)觀察子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞數(shù)目變化情況:Ang-(1-7)組與對照組比較無明顯差異（P＞0.05）;與對照組相比，AngⅡ組可誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞數(shù)目明顯增加(P＜0.05）;而與AngⅡ組相比，AngⅡ+Ang-(1-7)組的子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞數(shù)目明顯減少(P＜0.05）。

21、>　　5、Ang-(1-7)和AngⅡ?qū)Φ淖訉m內(nèi)膜上皮細(xì)胞活性的影響
　　細(xì)胞培養(yǎng)72 h后，免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測結(jié)果表明:對照組細(xì)胞有少量α-SMA陽性表達(dá)，大量的E-cadherin的陽性表達(dá);Ang-(1-7)組與之類似;與對照組相比，AngⅡ組細(xì)胞α-SMA表達(dá)明顯增加而E-cadherin的表達(dá)明顯降低;與AngⅡ組比較，AngⅡ+Ang-(1-7)組細(xì)胞α-SMA表達(dá)明顯降低而E-cadherin的表達(dá)明顯增加(P＜

22、0.05）。
　　細(xì)胞培養(yǎng)72 h后，酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測結(jié)果表明:與對照組比較，Ang-(1-7)組細(xì)胞上清液中FN和ColⅠ含量無明顯改變，AngⅡ組細(xì)胞上清液中FN和ColⅠ的含量明顯升高(P＜0.05）;與AngⅡ組比較，AngⅡ+ Ang-(1-7)組細(xì)胞上清液中FN和ColⅠ含量明顯減少（P＜0.05）。
　　細(xì)胞培養(yǎng)72 h后，western blot檢測結(jié)果顯示:對照組細(xì)胞有少量α-SMA陽性表

23、達(dá)，大量的E-cadherin陽性表達(dá);Ang-(1-7)組與之類似;與對照組相比，AngⅡ組細(xì)胞α-SMA表達(dá)明顯增加(P＜0.05)，E-cadherin的表達(dá)明顯減少（P＜0.05）;與AngⅡ組比較，AngⅡ+Ang-(1-7)組細(xì)胞α-SMA表達(dá)明顯減少(P＜0.05），E-cadherin的表達(dá)明顯增加(P＜0.05)。與免疫細(xì)胞化學(xué)染色法結(jié)果一致。
　　細(xì)胞培養(yǎng)72 h后，Real time PCR檢測結(jié)果顯示:對照

24、組細(xì)胞有少量α-SMA mRNA、FN mRNA和ColⅠmRNA陽性表達(dá)，大量的E-cadherinmRNA陽性表達(dá);Ang-(1-7)組與之類似;與對照組相比，AngⅡ組細(xì)胞α-SMA mRNA、FN mRNA和ColⅠmRNA表達(dá)明顯增加(P＜0.05），E-cadherin mRNA的表達(dá)明顯減少(P＜0.05）;與AngⅡ組比較，AngⅡ+Ang-(1-7)組細(xì)胞α-SMA mRNA、FN mRNA和ColⅠ mRNA表達(dá)明顯

25、減少（P＜0.05），E-cadherin mRNA的表達(dá)明顯增加(p＜0.05）。與免疫細(xì)胞化學(xué)染色法和western blot的檢測結(jié)果一致。
　　6、AngⅡ?qū)ψ訉m內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞增殖的影響
　　子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)24 h，48 h和72 h后，紫色結(jié)晶通過測定550nm處每個培養(yǎng)孔的吸光度值(A)觀察子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞數(shù)目變化情況:AngⅡ可誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞數(shù)目明顯增加(P＜0.05），且AngⅡ有呈劑量依賴性地促進(jìn)

26、子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞增殖作用;AngⅡ組細(xì)胞隨著培養(yǎng)時間延長，子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞增殖作用越明顯，但24 h與對照組比較，無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05），48 h，72 h時，AngⅡ組細(xì)胞數(shù)目與對照組比較明顯增加(P＜0.05)。
　　7、Ang-(1-7)對AngⅡ誘導(dǎo)的子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞增殖的影響
　　子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)24 h，48 h和72 h后，紫色結(jié)晶通過測定550 nm每個培養(yǎng)孔的吸光度值(A)觀察子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞數(shù)目

27、變化情況:Ang-(1-7)組與對照組比較無明顯差異(P＞0.05）;與對照組相比，AngⅡ組可誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞數(shù)目明顯增加(P＜0.05）;而與AngⅡ組相比，AngⅡ+Ang-(1-7)(10-5 mol/L)組的子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞數(shù)目明顯減少(P＜0.05）。
　　8、Ang-(1-7)和AngⅡ?qū)Φ淖訉m內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞活性的影響
　　細(xì)胞培養(yǎng)72 h后，免疫細(xì)胞化學(xué)染色法結(jié)果顯示:對照組細(xì)胞有少量α-SMA陽性表達(dá)，幾

28、乎無TGF-β1和IGF-Ⅰ陽性表達(dá);Ang-(1-7)組與之類似;與對照組相比，AngⅡ組細(xì)胞α-SMA、TGF-β1和IGF-Ⅰ表達(dá)明顯增加;與AngⅡ組比較，AngⅡ+Ang-(1-7)組細(xì)胞α-SMA、TGF-β1和IGF-Ⅰ表達(dá)明顯減少(P＜0.05）。
　　細(xì)胞培養(yǎng)72 h后，ELISA檢測結(jié)果顯示:與對照組比較，Ang-(1-7)組細(xì)胞上清液中TGF-β1、IGF-Ⅰ、ColⅠ和FN的含量無明顯改變，與AngⅡ組比較

29、，AngⅡ+Ang-(1-7)組細(xì)胞上清液中TGF-β1、IGF-Ⅰ、ColⅠ和FN含量明顯減少(P＜0.05）。
　　細(xì)胞培養(yǎng)72 h后，western blot檢測結(jié)果顯示:對照組細(xì)胞有少量α-SMA陽性表達(dá)，幾乎無TGF-β1和IGF-Ⅰ陽性表達(dá);Ang-(1-7)組與之類似;與對照組相比，AngⅡ組細(xì)胞α-SMA、TGF-β1和IGF-Ⅰ表達(dá)明顯增加;與AngⅡ組比較，AngⅡ+Ang-(1-7)組細(xì)胞α-SMA、TGF-

30、β1和IGF-Ⅰ表達(dá)明顯減少(P＜0.05），與免疫細(xì)胞化學(xué)染色法結(jié)果一致。
　　細(xì)胞培養(yǎng)72 h后，Real time PCR檢測結(jié)果顯示:對照組細(xì)胞有少量α-SMA mRNA陽性表達(dá)，幾乎無ColⅠ mRNA、FN mRNA、TGF-β1 mRNA和IGF-Ⅰ mRNA的陽性表達(dá);Ang-(1-7)組與之類似;與對照組相比，AngⅡ組細(xì)胞ColⅠ mRNA、FN mRNA、α-SMA mRNA、TGF-β1 mRNA和IGF-

31、ⅠmRNA表達(dá)明顯增加;與AngⅡ組相比，AngⅡ+Ang-(1-7)組細(xì)胞ColⅠmRNA、FN mRNA、α-SMA mRNA、TGF-β1 mRNA和IGF-Ⅰ mRNA表達(dá)明顯減少(P＜0.05)，與免疫細(xì)胞化學(xué)染色法和western blot檢測結(jié)果一致。
　　9、Ang-(1-7)和AngⅡ?qū)Φ淖訉m內(nèi)膜活性的影響
　　子宮內(nèi)膜組織培養(yǎng)72 h后，western blot檢測結(jié)果顯示:對照組有少量α-SMA陽性表達(dá)

32、，幾乎無TGF-β1和IGF-Ⅰ陽性表達(dá);Ang-(1-7)組與之類似;與對照組相比，AngⅡ組α-SMA、TGF-β1和IGF-Ⅰ表達(dá)明顯增加;與AngⅡ組相比，AngⅡ+Ang-(1-7)組α-SMA、TGF-β1和IGF-Ⅰ表達(dá)明顯減少(P＜0.05）。
　　子宮內(nèi)膜組織培養(yǎng)72 h后，Real time PCR檢測結(jié)果顯示:對照組組織中有少量α-SMA mRNA陽性表達(dá)，幾乎無TGF-β1 mRNA和IGF-ⅠmRNA陽性

33、表達(dá);Ang-(1-7)組與之類似;與對照組相比，AngⅡ組α-SMAmRNA、TGF-β1mRNA和IGF-Ⅰ mRNA表達(dá)明顯增加;與AngⅡ組比較，AngⅡ+Ang-(1-7)組α-SMA mRNA、TGF-β1mRNA和IGF-Ⅰ mRNA表達(dá)明顯減少(P＜0.05)，與western blot檢測結(jié)果一致。
　　結(jié)論:
　　1、成功地分離、培養(yǎng)及鑒定子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞及基質(zhì)細(xì)胞。
　　2、成功地在體外構(gòu)建子宮內(nèi)

34、膜三維立體結(jié)構(gòu)的培養(yǎng)及鑒定。
　　3、在體外AngⅡ呈時間和劑量依賴地促進(jìn)子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞增殖。
　　4、AngⅡ可以促進(jìn)子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞的表型轉(zhuǎn)化，表達(dá)肌成纖維細(xì)胞特異性蛋白α-SMA，而E-cadherin表達(dá)水平明顯下降;并改變其分泌功能，使ColⅠ和FN合成增加。
　　5、Ang-(1-7)能抑制AngⅡ誘導(dǎo)的子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞增殖。Ang-(1-7)能抑制AngⅡ誘導(dǎo)的子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞向肌成纖維細(xì)

35、胞的表型轉(zhuǎn)化，抑制肌成纖維細(xì)胞特異性蛋白α-SMA的表達(dá)，而E-cadherin表達(dá)水平明顯增加;并改變其分泌功能，使ColⅠ和FN合成減少。
　　6、在體外AngⅡ呈時間和劑量依賴地促進(jìn)子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞增殖。
　　7、AngⅡ可以促進(jìn)子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞活化，表達(dá)肌成纖維細(xì)胞特異性蛋白α-SMA，并改變其分泌功能，使ColⅠ、FN、TGF-β1和IGF-Ⅰ合成增加。
　　8、Ang-(1-7)能抑制AngⅡ誘導(dǎo)的子宮內(nèi)膜