紅色熒光蛋白標(biāo)記的胰腺癌移植瘤轉(zhuǎn)移模型的建立及其整體熒光成像.pdf

1、目的:建立穩(wěn)定、高表達(dá)紅色熒光蛋白(red fluorescent protein,RFP)的胰腺癌裸鼠移植瘤轉(zhuǎn)移模型,采用整體熒光成像系統(tǒng)實時監(jiān)測腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移及微轉(zhuǎn)移的發(fā)生,從而為人胰腺癌尤其是其侵襲與轉(zhuǎn)移的惡性生物學(xué)特性的研究提供了更為理想的動物模型。 方法:以慢病毒作為載體將RFP基因轉(zhuǎn)入人胰腺癌細(xì)胞株SW1990和CFPAC-1,經(jīng)梯度濃度G418篩選后96孔板有限稀釋法獲得穩(wěn)定、高表達(dá)RFP的單克隆細(xì)胞系SW199

2、0-RFP和CFPAC-1-RFP。并通過形態(tài)學(xué)觀察、細(xì)胞周期、細(xì)胞體內(nèi)外生長曲線等評價轉(zhuǎn)染后細(xì)胞生物學(xué)行為的變化。采用皮下注射熒光細(xì)胞SW1990-RFP建立人胰腺癌皮下移植瘤模型、通過外科手術(shù)原位移植皮下熒光腫瘤組織小塊建立原位移植瘤自發(fā)轉(zhuǎn)移模型、采用尾靜脈注射SW1990-RFP建立實驗性肺轉(zhuǎn)移模型和脾臟注射SW1990-RFP建立實驗性肝轉(zhuǎn)移模型。應(yīng)用整體熒光成像系統(tǒng)評價各組轉(zhuǎn)移模型腫瘤轉(zhuǎn)移及微轉(zhuǎn)移的發(fā)生。 結(jié)果:RFP

3、標(biāo)記的人胰腺癌細(xì)胞SW1990-RFP和CFPAC-1-RFP在熒光顯微鏡下發(fā)出強烈均勻的紅色熒光,RFP可在體內(nèi)、外持續(xù)穩(wěn)定表達(dá)而且熒光無明顯衰減。轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞周期、細(xì)胞體內(nèi)外生長曲線等生物學(xué)行為無明顯改變。應(yīng)用熒光細(xì)胞SW1990-RFP成功建各種胰腺癌移植瘤轉(zhuǎn)移模型,應(yīng)用整體熒光成像系統(tǒng)可以實時監(jiān)測皮下移植瘤和原位移植瘤的生長狀況。在原位移植瘤自發(fā)轉(zhuǎn)移模型組中成功的檢測到肝臟、肺臟、網(wǎng)膜和腹膜轉(zhuǎn)移及微小轉(zhuǎn)移的發(fā)生。在實