EGCG誘導(dǎo)前列腺癌細(xì)胞PC-3的凋亡及對Survivin蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的: 初步探討不同質(zhì)量濃度表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epigallocat-echin-3-gallate, EGCG)對人雄激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3增值及凋亡的影響及對Survivin蛋白表達(dá)的變化,從而為EGCG在雄激素非依賴性前列腺癌(Androgen Independent Prostate Cancer, AIPC)的臨床治療中提供理論依據(jù)。
　　方法: 1.使用不同質(zhì)量濃度的EGCG(0、20、40、80μ

2、g/ml)處理前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3,倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變。2.使用不同質(zhì)量濃度的EGCG(0、20、40、80μg/ml)處理前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3,通過細(xì)胞增值曲線及克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測EGCG對PC-3細(xì)胞增殖的影響。3.流式細(xì)胞儀檢測EGCG處理PC-3細(xì)胞株48h后,不同質(zhì)量濃度(0、20、40、80μg/ml)EGCG對PC-3細(xì)胞周期及凋亡的影響。4.用RT-PCR法檢測不同質(zhì)量濃度(0、20、40、80μg/ml

3、)EGCG作用48h后,Survivin mRNA在PC-3細(xì)胞中的表達(dá)差異。5.用Western blot法檢測不同質(zhì)量濃度(0、20、40、80μg/ml)EGCG作用48h后,Survivin蛋白在PC-3細(xì)胞中的表達(dá)差異。
　　結(jié)果: 1.倒置顯微鏡下觀察,對照組細(xì)胞貼壁生長,細(xì)胞呈多角形,胞質(zhì)飽滿,相鄰細(xì)胞相互融合。經(jīng)EGCG處理后,隨著濃度增加和作用時間的延長,細(xì)胞開始變圓,體積減小,核固縮出現(xiàn),核顏色加深,折光性增強(qiáng)

4、,部分細(xì)胞出現(xiàn)漂浮及壞死的現(xiàn)象,表現(xiàn)為濃度與時間依賴性。2.不同質(zhì)量濃度的 EGCG(0、20、40、80μg/ml)處理 PC-3后,經(jīng)細(xì)胞增值曲線及克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測:與對照組比較,EGCG能明顯抑制PC-3細(xì)胞的增殖(P<0.05)。3.EGCG能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,(0、20、40、80μg/ml)EGCG處理PC-3細(xì)胞48h后,凋亡率分別為:(1.96±0.90)％、(3.11±1.37)%、(12.32±1.82)%、(26.51

5、±2.19)%,與對照組比較,各實(shí)驗(yàn)組凋亡率明顯增加(P<0.05)。4.流式細(xì)胞術(shù)顯示:(0、20、40、80μg/ml)EGCG作用PC-3后,停滯在G0/G1期細(xì)胞百分率分別為:(30.66±1.30)%、(35.28±2.02)%、(43.78±2.23)%、(56.8±2.01)%。與對照組比較,各實(shí)驗(yàn)組G1期細(xì)胞百分率明顯增加(P<0.05),呈濃度依賴性(P<0.05)。5.不同質(zhì)量濃度(0、20、40、80μg/ml)E

6、GCG處理PC-3后,Survivin mRNA的表達(dá)明顯下調(diào),呈濃度依賴性(P<0.01)。6.不同質(zhì)量濃度(0、20、40、80μg/ml)EGCG處理PC-3后,Survivin蛋白的表達(dá)明顯下調(diào),呈濃度依賴性(P<0.01)。
　　結(jié)論: EGCG在體外能夠抑制前列腺癌PC-3的增殖,并表現(xiàn)為濃度和時間依賴性,即隨著藥物濃度的增加和作用時間的延長抑制作用越明顯;EGCG能誘導(dǎo)前列腺癌PC-3的凋亡,將細(xì)胞阻滯于G0/G1