牛胚胎體外生產(chǎn)技術(shù)研究.pdf

1、本研究利用屠宰黃牛卵巢，對體外胚胎生產(chǎn)的主要環(huán)節(jié)進(jìn)行了系列研究，旨在根據(jù)安徽當(dāng)?shù)氐馁Y源優(yōu)勢，因地制宜，建立合適的體外胚生產(chǎn)程序。研究結(jié)果如下： 卵巢運輸時，分別保存在30～38℃和20～25℃，12h左右?guī)Щ?，平均每個卵巢收集卵母細(xì)胞數(shù)分別為2.42枚和3.33枚，成熟率分別為70.75％和79.55％，差異均不顯著(P＞0.05)；卵裂率分別為48.06％和65.21％，桑囊胚率分別為20.08％和30.12％，差異均顯著(P

2、＜0.05)。 去除卵丘卵受精后的卵裂率為32.33％，極顯著低于卵丘完整的卵母細(xì)胞受精后的卵裂率63.21％(P＜0.01)，桑囊胚率不去卵丘卵顯著高于去除卵丘卵(31.66％vs15.29％，P＜0.05)。 成熟液中添加0、10％、20％和40％的牛卵泡液(來自4mm以上卵泡)，成熟率分別為73.28％、74.16％、69.88％和63.68％；40％添加組成熟率顯著低于未添加組(P＜0.05)，其它各組間沒有顯著

3、差異(P＞0.05)；添加組卵裂率及桑囊胚率均高于不添加組(P＜0.05)。成熟液中添加0、10ng/ml、20ng/ml和50ng/ml的表皮生長因子，成熟率分別為75％、77.72％、82.96％和80.42％，各組間沒有顯著差異(P＞0.05)；添加組卵裂率及桑囊率均高于不添加組(P＜0.05)。 凍精采用上浮法和直接離心洗滌法處理，卵裂率分別為31.20％和63.81％，差異顯著(P＜0.05)，桑囊率分別為22.82％

4、和33.21％，差異顯著(P＜0.05)。 無共培養(yǎng)時，分別用M199(添加10％FBS)、CR1aa(添加3mg/mlBSA)和SOFaa(添加3mg/mlBSA)三種培養(yǎng)基對體外胚進(jìn)行培養(yǎng)，卵裂率分別為47.28％、63.15％和60.94％，囊胚率分別為0、15.52％和19.20％，囊胚孵化率分別為0、58.33％和62.50％，M199組顯著低于其他兩組(P＜0.05)。與顆粒細(xì)胞共培養(yǎng)時，分別用M199(添加10％F

5、BS)、CR1aa(添加3mg/mlBSA)和SOFaa(添加3mg/mlBSA)三種培養(yǎng)基對體外胚進(jìn)行培養(yǎng)，卵裂率分別為48.20％、58.61％和59.78％，囊胚率分別為24.39％、22.37％和20.88％，囊胚孵化率分別為62.50％、66.67％和75％，各組間無顯著差異(P＞0.05)。 屠宰場采集卵巢時根據(jù)供體牛的年齡大小將所采集的卵巢分為兩組，青年牛(小于8月齡)和成年牛(大于8月齡)，平均每個卵巢回收的卵母

6、細(xì)胞數(shù)分別為2.50枚和4.02枚，成熟率分別為39.66％和87.27％，卵裂率分別為39.70％和71.37％，桑囊胚率分別為10.06％和31.81％，差異均顯著(P＜0.05)。 總之，本研究建立了相對比較實用而且有效的體外胚生產(chǎn)程序：采集的卵巢保存于20～25℃生理鹽水中，12h左右運回；卵母細(xì)胞成熟于M199，添加10％FBS、10％牛卵泡液或20ng/mlEGF中培養(yǎng)24h；凍精用Sp-TALP液(添加有3mg/m