犢牛體外胚胎生產(chǎn)技術(shù)的初步研究.pdf

1、為了建立高效的犢牛體外胚胎生產(chǎn)技術(shù)，本研究通過比較不同超數(shù)排卵方案、不同月齡犢牛、重復(fù)超排對荷斯坦奶牛犢牛超數(shù)排卵效果的影響；對超排獲得的犢牛卵母細(xì)胞和成年母牛卵母細(xì)胞的體外成熟、體外受精及早期胚胎發(fā)育潛能進(jìn)行了比較；同時探討了采卵時間（最后一次FSH到手術(shù)采卵之間的時間間隔）對犢牛卵母細(xì)胞回收率及卵母細(xì)胞質(zhì)量的影響；并對犢牛卵母細(xì)胞體外成熟和胚胎體外培養(yǎng)進(jìn)行了初步探討。
　　 (1)采用5種超數(shù)排卵方案處理同月齡犢牛，結(jié)果發(fā)現(xiàn)

2、：(FSH)25mg/頭，次，肌注一天兩次，間隔12h，連續(xù)注射4天，最后一次FSH隔24h采卵的超排方案，所得頭均采集卵泡數(shù)（97.3+23.5個）和頭均可用卵數(shù)（43.7+-9.7枚）顯著高于其他方案（P<0.05）。對比1～6月齡犢牛的超數(shù)排卵效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)2～6月齡犢牛組之間的頭均采集卵泡數(shù)和可用卵數(shù)差異不顯著（P<0.05），2～5月齡犢牛組頭均采集卵泡數(shù)和可用卵數(shù)均顯著高于1月齡組(P<0．05)，6月齡犢牛組與1月齡組之間

3、差異不顯著(P>O.05)。分析了重復(fù)超數(shù)排卵間隔時間對犢牛第二次超排效果的影響，發(fā)現(xiàn)第二次超排的頭均采集卵泡數(shù)和可用卵數(shù)均顯著低于第一次(P0.05），但均顯著高于間隔2周組(P<0.05)。
　　 (2)4種超排方案所回收犢牛卵母細(xì)胞的體外成熟率和受精后卵裂率差異不顯著(P>O.05)。2～6月齡之間犢牛卵母細(xì)胞體外成熟率和受精后卵裂率差異不顯

4、著（P<0.05）。無論是來自于不同超排方案還是不同月齡的犢牛卵母細(xì)胞的體外成熟率、受精后卵裂率和胚胎體外發(fā)育能力均顯著低于成年牛（P<0.05）。
　　 (3)采卵時間為間隔30h時，犢牛卵母細(xì)胞的回收率和成熟率顯著高于間隔24h組(P<0.05)，極顯著高于間隔18h組（P<0.01）；但可用卵率顯著低于間隔24h組和18h組（P<0.05）。
　　 (4)用成熟液M1（TCM-199+5mmol/L Hepes+0

5、.51ag/mL FSH+5μg/mL LH+llag/mL17-β-E2+15％ FBS）對犢牛卵母細(xì)胞進(jìn)行體外成熟培養(yǎng)24h，卵母細(xì)胞的成熟率和受精后的卵裂率均顯著高于M和M2成熟液組(P<0.05)。
　　 (5)犢牛胚胎從體外受精后到囊胚孵化所需的時間顯著比成年牛長（13.4+1.1天vs8.2+0.8天，P<0.05）。犢牛孵化囊胚的直徑顯著小于成年牛(276.3+4-35.lμm vs472.8士81.6μm，P<0