紅曲霉—人參雙向固體發(fā)酵及其產(chǎn)物藥理活性研究.pdf

1、目的：以人參為藥性發(fā)酵基質(zhì)，藥用真菌紅曲霉為發(fā)酵菌株進(jìn)行雙向固體發(fā)酵。以Monacolin K的含量為參照指標(biāo)，進(jìn)而優(yōu)化發(fā)酵條件，利用現(xiàn)代分析技術(shù)證明發(fā)酵終產(chǎn)物兼具藥用真菌紅曲霉和人參的主要藥效成分和功能。并過通體外和體內(nèi)的藥理實(shí)驗(yàn)考察發(fā)酵產(chǎn)物的降血脂和體外抗腫瘤的藥理活性。
　　方法：以pH、裝料量、初始含水量、培養(yǎng)時間、接種量、種齡、培養(yǎng)溫度、碳源、氮源9個單一的因素對發(fā)酵產(chǎn)物中的Monacolin K的含量的影響，設(shè)計(jì)出單因

2、素試驗(yàn)。并在此基礎(chǔ)上，選出以pH、初始含水量、培養(yǎng)時間、接種量四種因素及相應(yīng)三種水平進(jìn)行正交試驗(yàn)，以Monacolin K的含量為工藝參數(shù)，得出最優(yōu)的發(fā)酵條件。利用TLC和HPLC手段對發(fā)酵產(chǎn)物的主要活性成分進(jìn)行了定性分析。最后對發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行了降血脂和體外抗腫瘤的藥理活性研究。通過高脂飼料的喂養(yǎng)，建立起了實(shí)驗(yàn)性高脂血癥小鼠模型，然后對模型小鼠進(jìn)行低（400 mg/kg）、中（800 mg/kg）、高（1600 mg/kg）劑量的梯度給藥

3、，最終測定發(fā)酵產(chǎn)物對小鼠血清當(dāng)中的總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）含量的影響。同時將發(fā)酵產(chǎn)物用DMSO（二甲基亞礬）配制成200μg/ml、100μg/ml、50μg/ml、25μg/ml四個濃度，利用MTT法考察發(fā)酵產(chǎn)物體外對Hela（宮頸癌細(xì)胞）的抑制率。
　　結(jié)果：紅曲霉—人參雙向固體發(fā)酵的最佳發(fā)酵工藝條件為：100 ml發(fā)酵藥瓶中裝10 g人參粉末，再添

4、加4.5％可溶性淀粉，1.2%酵母膏，0.2%NaNO3，0.2%KH2PO4，0.2%MgSO4，調(diào)整初始含水量為60%，接種10%的種齡為48 h的種子液，用乳酸調(diào)pH=2.0，恒溫培養(yǎng)箱26℃下培養(yǎng)15 d。通過TLC法可以得出，紅曲酶—人參發(fā)酵產(chǎn)物中含有酸式Monacolin K，再通過TLC和HPLC法共同得出，紅曲酶—人參發(fā)酵產(chǎn)物中人參皂苷成分略有變化，說明紅曲菌具有一定的轉(zhuǎn)化人參皂苷的能力，并轉(zhuǎn)化出人參稀有皂苷Rg3。在降

5、血脂實(shí)驗(yàn)中，給藥組與實(shí)驗(yàn)性高脂血癥小鼠模型組比較，陽性對照組、高劑量給藥組及中劑量給藥組均能顯著性的（p<0.05）或極顯著性（p<0.01）的降低高脂血癥小鼠TG、TC和LDL-C的含量，中劑量和高劑量組降低TG、TC和LDL-C含量的趨勢要好于陽性對照組，但無顯著性差異（p>0.05）；中劑量組、高劑量組和陽性對照組的HDL-C的含量極顯著的高于高脂模型組（p<0.01），且高劑量組HDL-C的含量增高趨勢顯著性高于陽性對照組（p<

6、0.05）。在體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)中，紅曲霉-人參發(fā)酵產(chǎn)物對Hela細(xì)胞的生長有抑制作用，且隨著給藥濃度的升高，對Hela細(xì)胞增殖的抑制率也逐漸升高，發(fā)酵產(chǎn)物給藥濃度為200μg/ml，100μg/ml，50μg/ml，25μg/ml時對Hela細(xì)胞的抑制率分別為50.89%、36.19%、23.18%、20.66%。與濃度為25μg/ml組的抑制率相比較，200μg/ml，100μg/ml給藥組極顯著的抑制Hela細(xì)胞的增殖(p<0.01)

7、。50μg/ml給藥組比25μg/ml給藥組在抑制Hela細(xì)胞增殖的方面有較好的趨勢，但是差異顯著性并不明顯(p>0.05)。
　　結(jié)論：1.紅曲霉在以人參為發(fā)酵基質(zhì)的培養(yǎng)基上生長良好，發(fā)酵產(chǎn)物兼具紅曲霉和人參的主要藥效成分和功效。2.發(fā)酵產(chǎn)物中檢測出具有降血脂功效的有效成分Monacolin K。3.紅曲霉具有轉(zhuǎn)化人參皂苷的一定能力，并轉(zhuǎn)化出人參稀有皂苷Rg3。4.紅曲霉-人參的發(fā)酵產(chǎn)物具有很好的降血脂功效。5.紅曲霉-人參發(fā)酵