巢式RT-PCR檢測乳腺癌前哨淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的研究.pdf

1、浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文巢式RTPCR檢測乳腺癌前哨淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的研究姓名：周新惠申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：外科學(xué)(普外)指導(dǎo)教師：黃鐘英2000.2.1浙江大學(xué)湖濱校區(qū)碩士論文測腋淋巴結(jié)中MammaglobinmRNA的表達(dá)，探討Mammaglobin作為乳腺癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移檢測指標(biāo)的可行性和前哨淋巴結(jié)定位的方法及意義，研究這兩種技術(shù)聯(lián)合使用在乳腺癌早期淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移診斷、預(yù)后判斷及術(shù)式選擇中的臨床應(yīng)用價值。／^，1實(shí)驗(yàn)對象|’標(biāo)本取自1999卜

2、19999浙一醫(yī)院20例女性乳腺癌病人。年齡40—70歲，平均為5545歲。6例女性非腫瘤患者淋巴結(jié)。11乳腺癌或癌周組織：共20例，術(shù)后根治標(biāo)本中取得，均經(jīng)病理證實(shí)。12對照組：女性非腫瘤患者6例。其中結(jié)節(jié)性甲狀腺腫3例，慢性膽囊炎3例，共取得正常淋巴結(jié)lO枚。13常規(guī)病檢陽性組：經(jīng)HE染色切片證實(shí)有轉(zhuǎn)移的腋淋巴結(jié)麩10枚。J4常規(guī)病檢陰性組：經(jīng)IE染色切片證實(shí)無轉(zhuǎn)移的腋淋巴結(jié)共109枚。2實(shí)驗(yàn)方法：21前哨淋巴結(jié)的定位麻醉達(dá)成后于腫

3、塊周圍乳腺實(shí)質(zhì)內(nèi)均勻注射美藍(lán)2m]，術(shù)中或術(shù)后摘取藍(lán)染淋巴結(jié)，即為SLN。22標(biāo)本取材：術(shù)后從根治標(biāo)本中剔取各組淋巴結(jié)，每枚淋巴結(jié)均沿縱軸一分為二，一半送常規(guī)病檢，另一半置于一70C冷藏待實(shí)驗(yàn)用。整個過程嚴(yán)格避免上皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的交叉污染。23各組MammaglobinmRNA的檢測乳腺癌組織及腋窩淋巴結(jié)經(jīng)液氮研磨，Trizol抽提后行RT—PCR擴(kuò)增。產(chǎn)物經(jīng)15％瓊脂糖凝膠電泳，在B—actin245bp條帶擴(kuò)增成功的情況下，出現(xiàn)3