MMP-1蛋白在人乳腺癌中的表達(dá)定位及其臨床意義.pdf

1、目的:
　　目前，我國已成為世界上乳腺癌發(fā)病率增長最快的國家之一，在我國的很多大、中城市，乳腺癌在女性惡性腫瘤中已居第一位，并逐漸年輕化。因此，探索乳腺癌的發(fā)病機(jī)制，提高綜合治療效果，已成為當(dāng)今乳腺癌研究領(lǐng)域的重點(diǎn)之一。
　　乳腺癌是一類異質(zhì)性很高的惡性腫瘤，侵襲和轉(zhuǎn)移是病人死亡的最主要原因。基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)的降解和破壞（主要成分是Ⅳ型膠原、層粘連蛋白、纖維連接蛋白等）為腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移開辟了道路。多種蛋白酶家族可能促進(jìn)腫

2、瘤的侵襲轉(zhuǎn)移，其中最主要的蛋白酶是基質(zhì)金屬蛋白酶（Matrix Metalloproteinases，MMPs），它可破壞基底膜、降解細(xì)胞外基質(zhì)，參與腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移，還可通過改變細(xì)胞周圍的微環(huán)境而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。迄今為止，人類中已識(shí)別和定性的MMPs有二十八種。在所有的MMPs中，MMP-1（Matrix Metalloproteinase-1，MMP-1）是第一個(gè)被純化為蛋白和克隆成cDNA的脊椎動(dòng)物膠原酶。有研究顯示，MMP

3、-1可以降解基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)，血管內(nèi)皮細(xì)胞同時(shí)也被誘導(dǎo)增生，在腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移過程中起著重要作用。但是相關(guān)的研究報(bào)道，尤其是在乳腺癌中有關(guān)MMP-1的研究報(bào)道甚少。
　　本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌ER蛋白表達(dá)可以定位在細(xì)胞核和/或細(xì)胞質(zhì)膜中，而且ER蛋白的表達(dá)定位與乳腺癌的生物學(xué)行為及預(yù)后密切相關(guān)。因此，本研究的目的是了解MMP-1蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá)定位及蛋白表達(dá)量，以及MMP-1蛋白與乳腺癌患者臨床病理特征，以及與ER

4、和HER-2表達(dá)的關(guān)系，探討AP-1在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展過程中所起的作用，為將MMP-1作為新的靶分子引入腫瘤的臨床治療提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　1、樣本來自2013年1月至2014年3月大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院外科切除的浸潤性乳腺癌手術(shù)標(biāo)本，根據(jù)前期研究結(jié)果，從中篩選ER核陽性組（28例），ER質(zhì)膜陽性組（23例），Her-2(3+)組22例，三陰性乳腺癌組（26例），共99例。所有患者均為女性，年齡32-86歲，平均

5、年齡54歲。術(shù)前均未進(jìn)行化療、放療等新輔助治療。99例樣本中非特殊性浸潤性導(dǎo)管癌71例，浸潤性小葉癌25例，粘液癌3例。
　　2、采用免疫組織化學(xué)和Western-blot方法分別觀察MMP-1蛋白在乳腺癌細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)及腫瘤間質(zhì)中的表達(dá)定位及蛋白表達(dá)量，分析MMP-1蛋白表達(dá)定位和表達(dá)量與乳腺癌雌激素受體(estrogen receptor，ER)、孕激素受體(progesterone receptor，PR)、人表皮生長因子受

6、體2(human epidermal growthfactor receptor，HER2)及臨床病理特征的關(guān)系。
　　3、全部的數(shù)據(jù)分析和統(tǒng)計(jì)學(xué)處理均采用spss17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行。由于比較對象的不同，根據(jù)情況分別采用x2檢驗(yàn)、Spearman相關(guān)性分析、秩和檢驗(yàn)（Kruskall-Wallis H檢驗(yàn)）、獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)（Independent Samplet Test檢驗(yàn)）等，以p＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　

7、　結(jié)果:
　　1、免疫組織化學(xué):
　　MMP-1蛋白表達(dá)定位于乳腺癌的癌細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)及腫瘤間質(zhì)中。(1) MMP-1在癌細(xì)胞核陽性表達(dá)率為57.58％(57/99)，細(xì)胞質(zhì)陽性表達(dá)率為62.63％(62/99)，其中，MMP-1在癌細(xì)胞胞核陽性表達(dá)率與患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)、年齡、停經(jīng)有關(guān)(p＜0.05)，而與患者的腫瘤的大小、組織分級、臨床分期無關(guān)(p＞0.05)，在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組、＞50歲組和停經(jīng)組中，MMP-1核陽性表

8、達(dá)率分別高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組、≤50歲及無停經(jīng)組;MMP-1在癌細(xì)胞胞質(zhì)陽性表達(dá)率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(p＜0.05)，而與患者的年齡、停經(jīng)、腫瘤最大徑、組織分級、臨床分期無關(guān)(p＞0.05)，其中無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組MMP-1在癌細(xì)胞胞質(zhì)中陽性表達(dá)率低于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)陽性移組;MMP-1在腫瘤間質(zhì)中的陽性表達(dá)率為71.72％(71/99)，MMP-1在腫瘤間質(zhì)陽性表達(dá)率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況有關(guān)(p＜0.05)，而與患者的年齡、停經(jīng)狀況、腫瘤大小、臨床分期無

9、關(guān)(p＞0.05)，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中MMP-1在腫瘤間質(zhì)中的陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(p＞0.05)。
　　(2) MMP-1在乳腺癌中的癌細(xì)胞胞質(zhì)中的表達(dá)率在三陰性乳腺癌(TripleNegative Breast Cancer，TNBC)組最高(76.92％，20/26)，其次為ER質(zhì)膜陽性組(73.91％，17/23)。MMP-1在癌細(xì)胞核中表達(dá)率在ER核陽性組最高(89.29％，25/28)。MMP-1在腫瘤間質(zhì)中的表

10、達(dá)以TNBC組最高(92.31％，24/26)。
　　(3)MMP-1在癌細(xì)胞胞核中的表達(dá)率與ki-67表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)(p=0.000，r=-0.353);
　　MMP-1在癌細(xì)胞胞質(zhì)中的表達(dá)率與ki-67表達(dá)呈顯著正相關(guān)(p=0.007，r=0.270);
　　腫瘤間質(zhì)MMP-1表達(dá)率與Ki-67表達(dá)呈顯著正相關(guān)(p=0.000 r=0.420)。
　　2、Western-blot
　　(1) MMP-

11、1在TNBC組的表達(dá)量最高(33.90±7.56)，與其他組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　(2) MMP-1的表達(dá)量與腫瘤大小、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，腫瘤直徑＞2cm組的MMP-1表達(dá)量高于腫瘤直徑≤2cm組的蛋白表達(dá)量(p＜0.05);臨床分期Ⅲ+Ⅳ組的蛋白表達(dá)量高于Ⅰ+Ⅱ組的蛋白表達(dá)量(p＜0.05);有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的蛋白表達(dá)量高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達(dá)量(p＜0.05)。
　　(3) MMP-1蛋白在

12、ki-67(+)組的表達(dá)量高于ki-67（-）組(p＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.MMP-1蛋白表達(dá)定位于乳腺癌細(xì)胞胞核、細(xì)胞質(zhì)及腫瘤間質(zhì)中。
　　2.MMP-1蛋白在乳腺癌癌細(xì)胞質(zhì)及腫瘤間質(zhì)中的表達(dá)水平與乳腺癌患者預(yù)后不良因素的相關(guān)。
　　3.MMP-1蛋白在乳腺癌細(xì)胞核中的表達(dá)水平與患者預(yù)后較好的因素相關(guān)。
　　4.MMP-1蛋白在HER-2(3+)乳腺癌和TNBC中表達(dá)量高于ER核陽性組乳腺癌，