靈桿菌多糖對(duì)小鼠免疫功能調(diào)節(jié)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、細(xì)菌脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)即細(xì)菌內(nèi)毒素(endotoxin)是一種含有脂類(lèi)的多糖,具有廣泛生物學(xué)活性,主要表現(xiàn)出免疫增強(qiáng)作用。但是LPS同時(shí)表現(xiàn)出強(qiáng)烈的毒性反應(yīng)(Shwartzman反應(yīng),熱原性等),因此阻礙了它在臨床上的應(yīng)用,所以許多研究者一直致力于LPS的減毒研究。靈桿菌多糖(Hemarisin.Bacterium Prodigiosum lipopolysaccharides,BP-LPS)即是基于

2、此目的制取的一種免疫活性物質(zhì)。BP-LPS也是一種細(xì)菌脂多糖,它不僅具有普通LPS的廣泛生物學(xué)活性,如免疫促進(jìn)作用、抗腫瘤作用等,而且由于它是從非致病性革蘭氏陰性菌“產(chǎn)色型靈桿菌BP-S003號(hào)”中提取,因此具有毒性低的優(yōu)點(diǎn)。本研究初步探討B(tài)P-LPS對(duì)小鼠免疫功能的調(diào)節(jié)作用,為BP-LPS的臨床使用提供可靠的科學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 目的:
　　 研究靈桿菌多糖對(duì)正常小鼠、免疫抑制小鼠和荷瘤小鼠免疫功能的調(diào)節(jié)作用。

3、　　 方法:
　　 1.用兔紅細(xì)胞作為免疫原建立小鼠體液免疫反應(yīng)模型。
　　 2.皮下注射環(huán)磷酰胺建立免疫抑制小鼠模型。
　　 3.皮下接種S180腫痛細(xì)胞建立荷瘤小鼠模型。
　　 4.微量溶血酶標(biāo)儀分光光度法測(cè)定正常小鼠、免疫抑制小鼠和荷瘤小鼠的血清溶血素水平。
　　 5.采用二硝基氟苯(dinitro-fluorobenzene,DNFB)誘導(dǎo)遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(delayed-type hyp

4、ersensitivity,DTH)模型,測(cè)定正常小鼠、免疫抑制小鼠和荷瘤小鼠的細(xì)胞免疫功能。
　　 6.采用碳粒廓清法測(cè)定正常小鼠、免疫抑制小鼠和荷瘤小鼠單核巨噬細(xì)胞的吞噬功能。
　　 7.運(yùn)用顯微鏡計(jì)數(shù)法測(cè)定正常小鼠和免疫抑制小鼠外周血白細(xì)胞總數(shù)。
　　 8.MTT法檢測(cè)小鼠脾細(xì)胞的代謝活力,ELISA法檢測(cè)腫瘤壞死因子α(TNF-α)和干擾素γ(IFN-γ)的含量。
　　 結(jié)果:
　　 1.

5、抗兔紅細(xì)胞溶血素峰時(shí)間為免疫后d6(免疫當(dāng)天為d0)；最適兔紅細(xì)胞抗原量為20％。
　　 2.每鼠腹腔注射0.2ml 2％兔紅細(xì)胞,氫化可的松(2.5mg/kg)、環(huán)磷酰胺(20mg/kg)可以抑制小鼠抗兔紅細(xì)胞溶血素的生成；甘露聚糖肽(4mg/kg)對(duì)正常小鼠抗兔紅細(xì)胞溶血素水平影響不大,但對(duì)環(huán)磷酰胺免疫抑制小鼠的血清溶血素水平具有明顯提高作用。
　　 3.BP-LPS對(duì)正常小鼠血清溶血素水平、遲發(fā)型超敏反應(yīng)、單核吞噬

6、細(xì)胞吞噬功能以及外周血白細(xì)胞數(shù)有輕微促進(jìn)作用,但是與對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 4.BP-LPS給藥劑量為40 U/kg和20 U/kg可以提高免疫抑制小鼠血清溶血素水平、遲發(fā)型超敏反應(yīng)、單核吞噬細(xì)胞吞噬功能以及外周血白細(xì)胞數(shù),與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 5.BP-LPS給藥劑量為40 U/kg和20 U/kg可以提高荷瘤小鼠血清溶血素水平、遲發(fā)型超敏反應(yīng)和單核吞噬細(xì)胞吞噬功能,并表現(xiàn)出良好的抑瘤作用,可以提高

7、脾臟臟器指數(shù),與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 6.BP-LPS終濃度為20 U/ml和10 U/ml時(shí)可以提高荷瘤小鼠脾細(xì)胞的代謝活力,并能促進(jìn)脾細(xì)胞分泌TNF-α和IFN-γ,與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:
　　 1.以兔紅細(xì)胞作為抗原成功建立小鼠體液免疫反應(yīng)動(dòng)物模型,可用于藥物對(duì)體液免疫功能影響的研究。
　　 2.微量溶血酶標(biāo)儀分光光度法測(cè)定小鼠血清溶血素具有樣品需要量少、系統(tǒng)誤差小和操作