鵝細(xì)小病毒結(jié)構(gòu)蛋白基因遺傳進(jìn)化分析及其基因免疫研究.pdf

1、鵝細(xì)小病毒(gooseparvovirusGPV)是細(xì)小病毒科(Parvoviridate)、細(xì)小病毒屬(ParvovirusGenus)的成員。主要感染1月齡內(nèi)雛鵝和雛番鴨以急性腸炎及肝、腎、心實質(zhì)臟器炎癥為特征的烈性傳染病。該病危害程度與日齡密切相關(guān)，10日齡內(nèi)雛鵝發(fā)病率和死亡率可達(dá)100％，在易感群中的致死率高達(dá)70％，以后發(fā)病隨日齡增大而逐漸減少。但近幾年有報道稱該病的發(fā)病日齡有增大趨勢，超過30日齡的占14.3％，這可能與鵝細(xì)

2、小病毒毒力增強(qiáng)和基因變異有關(guān)。自1956年我國學(xué)者方定一首次發(fā)現(xiàn)并分離到病毒至今，國內(nèi)外一直有分離到該病毒的報道，說明該病已經(jīng)呈世界范圍流行，對養(yǎng)鵝業(yè)發(fā)展威脅很大。 該病毒可造成大鵝呈—過性隱性感染，不表現(xiàn)發(fā)病癥狀，但可帶毒、排毒造成病毒的水平或垂直傳播。目前本病的預(yù)防主要是采用疫苗進(jìn)行免疫接種。小鵝除采用疫苗接種外，還要結(jié)合小鵝瘟高免血清進(jìn)行緊急預(yù)防。因此尋找該病毒的毒力基因及抗原性基因遺傳演化規(guī)律，篩選合適的疫苗進(jìn)行有效防控

3、；同時研制安全無毒有效的基因工程疫苗替代活苗免疫，將是逐步控制、消除本病的大趨勢。 本研究首先分離鑒定了黑龍江省鵝細(xì)小病毒發(fā)病地區(qū)的一株病毒，命名為GPVHG\21，該毒株的ELD50值顯示其為一強(qiáng)毒株。以GPVHG\21株和兩致弱疫苗株GPVHg1株、GPVHg2株為研究對象，分別克隆、測序三個病毒株的結(jié)構(gòu)蛋白基因片段，共得到九個克隆片段，即GPVHG\21VP1、GPVHG\21VP2、GPVHG\21VP3片段；GPVHg

4、1VP1、GPVHg1VP2、GPVHg1VP3片段和GPVHg2VP1、GPVHg2VP2、GPVHg2VP3片段。之后采用DNAStar分子生物學(xué)分析軟件，對上述三個毒株的共九個克隆片段進(jìn)行比較分析。通過系統(tǒng)演化分析，揭示了GPV的遺傳演化與地域因素的相關(guān)性規(guī)律；通過對GPVHG\21株結(jié)構(gòu)蛋白三個完整基因片段的抗原性預(yù)測圖譜比較，發(fā)現(xiàn)在三段基因片段的非重疊區(qū)，也存在抗原性位點(diǎn)的信息；通過比較還發(fā)現(xiàn)GPVHg2疫苗株與GPVHG\2

5、1分離株抗原性圖譜更為接近，即采用以GPVHg2疫苗株去防治以GPVHG\21毒株引發(fā)的鵝細(xì)小病毒病將更為合理有效。另外通過對強(qiáng)毒株GPVHG\21和弱毒株GPVHg1、GPVHg2結(jié)構(gòu)蛋白基因VP1序列的比較研究，發(fā)現(xiàn)了與GPV毒力強(qiáng)弱有關(guān)的基因位點(diǎn)，即VP1基因的第1611位和第2127位的核苷酸差異與毒株毒力強(qiáng)弱有關(guān)。此外以pcDNA5/TO為載體，以GPVHG\21株的三個結(jié)構(gòu)蛋白基因片段為研究對象，分別構(gòu)建了三個結(jié)構(gòu)蛋白基因片