NDRG1基因與乳腺癌生物學(xué)行為相關(guān)性及其機(jī)制研究.pdf

1、乳腺癌的發(fā)病率和死亡率逐年升高，是嚴(yán)重威脅女性身心健康的惡性腫瘤之一，而乳腺癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是影響其療效的主要因素。因此，迫切需要尋找一個(gè)敏感、能早期預(yù)測(cè)乳腺癌轉(zhuǎn)移的分子生物學(xué)標(biāo)記物及抑制其轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的基因治療靶點(diǎn)，為臨床對(duì)乳腺癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移作出早期預(yù)測(cè)提供一定的參考依據(jù)，從而有助于及時(shí)采取更加有效的治療措施。 人NDRGl(N-mycDownstreamRegulatedGene1)是由5組研究人員于近年相繼獨(dú)立發(fā)現(xiàn)和分離的與惡性

2、腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的基因。NDRGl定位于人染色體8q24．2，cDNA全長(zhǎng)¨82bp，其編碼的蛋白質(zhì)分子量為43kDa。有學(xué)者在膀胱癌、結(jié)腸癌和前列腺癌中對(duì)NDRGl與腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移的關(guān)系進(jìn)行了研究，但該基因與腫瘤轉(zhuǎn)移的相關(guān)性究竟如何，尚存在很大爭(zhēng)議。尤其對(duì)NDRGl與乳腺癌生物學(xué)行為相關(guān)性的探討，目前國(guó)內(nèi)、外還沒(méi)有系統(tǒng)的研究報(bào)道，更未見(jiàn)到有關(guān)其抑制癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制的研究報(bào)道。 本課題試圖從臨床人體乳腺癌組織、細(xì)

3、胞株和裸鼠乳墊下移植瘤三方面對(duì)NDRGl基因表達(dá)與乳腺癌生物學(xué)行為的相關(guān)關(guān)系及其作用的分子機(jī)制進(jìn)行研究，以尋找預(yù)測(cè)乳腺癌轉(zhuǎn)移的分子生物學(xué)標(biāo)記物及其分子治療的新靶點(diǎn)。 第一部分人體乳腺癌組織和乳腺癌細(xì)胞株中NIDRGl表達(dá)與腫瘤 轉(zhuǎn)移的相關(guān)關(guān)系研究 目的：探討人體乳腺癌組織和乳腺癌細(xì)胞株中NDRGl表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移的相關(guān)關(guān)系。 方法：采用免疫組織化學(xué)、realtimeRT-PCR檢測(cè)人體乳腺癌組織和乳腺癌細(xì)胞

4、株中NDRGl蛋白和mRNA的表達(dá)。 結(jié)果：與無(wú)轉(zhuǎn)移病例的乳腺癌組織相比，在有轉(zhuǎn)移病例的乳腺癌組織中，NDRGl蛋白和mRNA表達(dá)均明顯降低，僅相當(dāng)于前者的47．7％、20．33％(P

5、相關(guān)關(guān)系，提示該基因可望成為預(yù)測(cè)乳腺癌轉(zhuǎn)移的分子生物學(xué)標(biāo)記物。 第二部分過(guò)表達(dá)NDRGl對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移潛能的體內(nèi)、外影響 目的：探討過(guò)表達(dá)NDRGl對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移潛能的體內(nèi)、外影響。 方法：重組真核表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-NDRGl．N3脂質(zhì)體法穩(wěn)定轉(zhuǎn)染MDA-MB-231細(xì)胞，用RT-PCR、westernblot、免疫熒光法進(jìn)行克隆鑒定，篩選出穩(wěn)定過(guò)表達(dá)ND

6、RGl的細(xì)胞株。用BrdU摻入法、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)NDRGl過(guò)表達(dá)對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期的影響；細(xì)胞體外侵襲實(shí)驗(yàn)和遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)NDRGl過(guò)表達(dá)后MDA-MB-231細(xì)胞侵襲和遷移能力的變化。同時(shí)建立裸鼠乳墊下移植瘤模型，觀察NDRGl過(guò)表達(dá)對(duì)移植瘤的生長(zhǎng)速度和侵襲轉(zhuǎn)移的影響。 結(jié)果：獲得穩(wěn)定高表達(dá)NDRGl的MDA-MB-231細(xì)胞克隆pEGFP-NDRGl-N3。體外實(shí)驗(yàn)表明，與未轉(zhuǎn)染組和轉(zhuǎn)染pEGFP-N3空

7、載組相比，pEGFP-NDRGl—N3組細(xì)胞BrdU摻入率明顯降低，細(xì)胞周期Go／Gl期比例增高，S期比例明顯減低。與未轉(zhuǎn)染組和轉(zhuǎn)染pEGFP-N3空載組相比，pEGFP-NDRGl一N3組體外侵襲能力降低為前者的72．3％、76．7％(P<0．05)，而體外遷移能力的改變則未見(jiàn)顯著性差異。在裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，pEGFP-NDRGl一N3組裸鼠乳摯下移植瘤生長(zhǎng)較pEGFP-N3組明顯緩慢，腫瘤重量明顯減輕，侵襲性明顯下降。

8、結(jié)論：NDRGl過(guò)表達(dá)在體內(nèi)、外均能抑制人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞增殖、侵襲能力和轉(zhuǎn)移潛能。 第三部分過(guò)表達(dá)NDRGI影響MDA-MB-231細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制的初步探討 目的：初步探討過(guò)表達(dá)NDRGl影響MDA-MB-23l細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移作用的分子機(jī)制。 方法：采用realtimeRT-PCR、westernblot檢測(cè)NDRGl過(guò)表達(dá)后MDA-MB-231細(xì)胞中MMP-2、MMP-9mRNA和蛋白