TLR3與RIG-I相關(guān)信號分子在鴨呼腸孤病毒感染雛雞免疫器官中表達(dá)變化研究.pdf

1、鴨呼腸孤病毒(Duck reovirus，DRV)感染雛鴨后，主要侵害雛鴨免疫系統(tǒng)，如脾、法氏囊、胸腺，引起雛鴨免疫器官損傷，從而繼發(fā)其它細(xì)菌感染。天然免疫系統(tǒng)中有很多模式識別受體可以識別病毒核酸，從而激活機體的抗病毒反應(yīng)。TLR3和RIG-Ⅰ可以特異性的識別侵入機體的雙鏈RNA病毒，激活下游的信號分子，最終誘導(dǎo)IFNβ的釋放，引起抗病毒免疫反應(yīng)。目前，對鴨呼腸孤病毒誘導(dǎo)抗病毒反應(yīng)的信號通路還不明確，本研究通過病毒感染動物模型的復(fù)制，研

2、究鴨呼腸孤病毒感染雛鴨后兩條抗病毒反應(yīng)信號通路中相關(guān)分子的mRNA表達(dá)變化，初步闡明病毒引起的主要抗病毒天然免疫信號途徑。主要研究內(nèi)容如下:
　　1.鴨呼腸孤病毒感染雛鴨模型的復(fù)制將30羽櫻桃谷雛鴨隨機均分為感染組和對照組兩組，于雛鴨7日齡對感染組雛鴨頸部皮下注射鴨呼腸孤病毒（HP20090318株）0.2mL/羽，對照組注射等量的生理鹽水。分別于接毒后1d、3d、5d、7d、14d進行剖殺，每組剖殺3羽。眼觀病理學(xué)觀察，接毒后1

3、d和3d雛鴨脾表面分布有大小不一的紅色斑點，5d和7d雛鴨脾表面分布有灰白色病灶病灶周圍有紅色斑點;法氏囊與胸腺未見明顯眼觀病變。組織病變可見接毒后1d和3d脾組織內(nèi)出現(xiàn)大量紅細(xì)胞，紅髓、白髓界限不清，接毒后5d和7d在組織內(nèi)出現(xiàn)壞死灶及肉芽腫;感染組法氏囊淋巴濾泡數(shù)目減少，出現(xiàn)空泡;胸腺組織內(nèi)未見明顯病變。用免疫組化染色結(jié)果顯示鴨呼腸孤病毒存在于脾巨噬細(xì)胞以及壞死灶中。RT-PCR檢測鴨呼腸孤病毒S2基因，發(fā)現(xiàn)在接毒后1d、3d、5d

4、、7d以及14d感染組雛鴨脾均有DRV存在。上述結(jié)果表明鴨呼腸孤病毒感染雛鴨模型復(fù)制成功。
　　2.TLR3、TRIF、IRF3、RIG-Ⅰ、IFNβ信號分子mRNA表達(dá)變化檢測(1) TLR3抗病毒信號通路中，TLR3與其直接激活的TRIF在機體內(nèi)表達(dá)水平在接毒后1d、3d、5d、7d以及14d表達(dá)差異不明顯，在脾、胸腺與法氏囊三個組織中，法氏囊內(nèi)各信號分子的表達(dá)水平高于脾和胸腺。IRF3是TLR3信號通路與RIG-Ⅰ信號通路中

5、共同的中間分子，其在脾與法氏囊中接毒后3d的相對表達(dá)水平與接毒后1d相比上升明顯，接毒后5d、7d以及14d相對表達(dá)水平逐漸下降但與接毒后1d相比差異不明顯，并且在不同感染日齡法氏囊內(nèi)的相對表達(dá)水平均高于相應(yīng)日齡的脾;IRF3在胸腺組織中接毒后1d表達(dá)明顯上調(diào)，其他日齡上調(diào)不明顯。
　　(2)RIG-Ⅰ抗病毒信號通路中RIG-Ⅰ的表達(dá)水平要高于TLR3信號分子;其中在法氏囊內(nèi)的表達(dá)水平高于脾和胸腺，在接毒后3d、5d表達(dá)水平最高。

6、
　　(3)IFNβ是兩條信號通路的最終激活因子，并介導(dǎo)抗病毒效應(yīng)，其在脾、胸腺與法氏囊三個組織中的相對表達(dá)水均呈現(xiàn)上調(diào)趨勢，接毒后3d和5d相對表達(dá)水平上調(diào)。同樣在法氏囊內(nèi)的相對表達(dá)水平要高于脾和胸腺兩組織。
　　本研究結(jié)果表明:成功復(fù)制了鴨呼腸孤病毒HP20090318株感染雛鴨動物模型;鴨呼腸孤病毒進入雛鴨體內(nèi)主要由RIG-Ⅰ進行識別，為主要的抗病毒反應(yīng)通路;在脾、法氏囊和胸腺三個組織中，法氏囊內(nèi)各信號分子的表達(dá)水平要