乙型腦炎病毒感染小膠質(zhì)細(xì)胞中TLR3、RIG-I信號(hào)通路分析研究.pdf

1、乙型腦炎(Japanese encephalitis，JE)是由日本乙型腦炎病毒(Japanese encephalitisvirus，JEV)引起的一種人畜共患病，患者多表現(xiàn)為發(fā)熱、腹瀉、頭痛、惡心、意識(shí)水平下降、顫抖以及行動(dòng)異常等，而豬群受感染后表現(xiàn)為明顯生殖障礙。靶向中樞神經(jīng)系統(tǒng)，引發(fā)中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥反應(yīng)，是乙型腦炎病毒導(dǎo)致人和動(dòng)物發(fā)病、死亡的主要因素。而小膠質(zhì)細(xì)胞過(guò)度激活及其誘導(dǎo)的大量炎癥因子分泌，則是JEV引發(fā)腦部炎癥反應(yīng)的重

2、要途徑。但JEV通過(guò)何種信號(hào)通路激活小膠質(zhì)細(xì)胞，其分子機(jī)制如何等科學(xué)問(wèn)題仍不清楚。
　　 本研究首先從TLR3和RIG-I信號(hào)通路入手，研究了JEV感染小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞之后炎癥因子的表達(dá)、信號(hào)通路的激活情況。
　　 具體研究?jī)?nèi)容如下:
　　 以小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞系BV-2為體外模型，研究了乙型腦炎病毒在該細(xì)胞中的增殖情況，發(fā)現(xiàn)該病毒可以感染BV-2，但在該細(xì)胞中的增殖滴度較低，熒光定量檢測(cè)C基因拷貝數(shù)在48h內(nèi)增加不超

3、過(guò)10倍。經(jīng)熒光定量PCR與ELISA方法檢測(cè)，乙型腦炎病毒感染能有效刺激細(xì)胞因子、趨化因子如TNF-α、IL-6、CCL-2表達(dá)量顯著上調(diào);同時(shí)，Western Blot檢測(cè)結(jié)果顯示TLR3、RIG-I蛋白表達(dá)量因乙腦病毒刺激表現(xiàn)明顯上調(diào)，且該病毒刺激能誘導(dǎo)信號(hào)通路激酶ERK、p38MAPK磷酸化蛋白及轉(zhuǎn)錄因子NF-κB、AP-1的核內(nèi)表達(dá)量均顯著上調(diào)。通過(guò)shRNA轉(zhuǎn)染方法分別對(duì)TLR3和RIG-I進(jìn)行干擾，觀察干擾后上述指標(biāo)的變化