外殼蛋白羧端序列缺失對(duì)煙草花葉病毒侵染性的影響.pdf

1、煙草花葉病毒是煙草花葉病毒屬的典型成員，為單組分正義單鏈RNA病毒，基因組全長(zhǎng)6395，病毒RNA由外殼蛋白包裝成長(zhǎng)約300nm，直徑約18nm的桿狀病毒粒子。TMV系統(tǒng)感染煙草后，CP表達(dá)量可達(dá)到被感染煙草總蛋白的7％。煙草花葉病毒的CP亞基由4個(gè)α螺旋組成，蛋白的N端和C端暴露在外部，并且研究表明羧端4個(gè)氨基酸對(duì)于穩(wěn)定整個(gè)蛋白三維結(jié)構(gòu)的作用不明顯，在利用病毒載體表達(dá)外源多肽的時(shí)候，本實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)了TMV-U1株系的羧端若干氨基酸的缺失

2、并不影響融合外源肽的外殼蛋白的高效表達(dá)，并曾經(jīng)在CP羧端152位后插入外源肽并缺失野生型CP羧端相應(yīng)的六個(gè)氨基酸序列(T153-T158)的重組病毒仍然能高效表達(dá)。 本文主要對(duì)野生型煙草花葉病毒(TMV-U1)的外殼蛋白羧端序列進(jìn)行系列缺失突變，研究羧端若干氨基酸的缺失對(duì)于病毒侵染性的影響，以此來(lái)確定外殼蛋白羧端氨基酸的保守性，并且為利用煙草病毒載體表達(dá)外源肽提供一定的參考價(jià)值。 在對(duì)外殼蛋白羧端氨基酸的缺失研究中，觀察

3、到TMV-U1株系的外殼蛋白羧端序列缺失六個(gè)氨基酸(保留152個(gè)氨基酸)仍能較強(qiáng)系統(tǒng)侵染煙草并高水平表達(dá)外殼蛋白，且能在新生葉里復(fù)制大量完整的病毒粒子，但相對(duì)于野生型，其侵染性已經(jīng)顯現(xiàn)弱化趨勢(shì)，而缺失七個(gè)氨基酸(保留151個(gè)氨基酸)，則病毒的長(zhǎng)距離運(yùn)輸能力弱化，在新生葉中只能檢測(cè)到病毒基因組，但不能檢測(cè)到外殼蛋白和完整病毒粒子。 外殼蛋白羧端缺失四個(gè)和五個(gè)氨基酸的突變病毒均能正常系統(tǒng)感染煙草，高效表達(dá)外殼蛋白，侵染性與野生型相當(dāng)