豬囊尾蚴小熱休克蛋白的免疫原性分析.pdf

1、利用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)從豬囊尾蚴總RNA中擴增出小熱休克蛋白(small heat shock protein,sHSP)基因,測序證實所克隆的基因序列與國外報道的豬囊尾蚴sHSP基因序列同源性為99.4％.將該基因克隆至原核表達載體pGEX-4T-1,在大腸桿菌BL21中以GST融合蛋白的形式表達,SDS-PAGE分析證明,表達產(chǎn)物為64ku的融合蛋白,呈可溶性表達,經(jīng)凝膠掃描、Gel-Pro Analyzer分析,

2、表達量約占菌體可溶性蛋白的30％.免疫學分析(Western blotting、ELISA)結(jié)果表明,sHSP能與豬囊尾蚴血清反應(yīng).將表達產(chǎn)物電泳后切膠回收免疫小鼠,進行Western blotting和間接ELISA檢測,其抗血清能與豬囊蟲粗抗原及純化的sHSP重組融合蛋白產(chǎn)物發(fā)生免疫學反應(yīng),這為探索新的免疫重組抗原和研制多分子疫苗提供理論依據(jù)和實驗材料.利用生物信息學技術(shù)蛋白質(zhì)專家分析系統(tǒng)對sHSP基因翻譯后加工修飾預(yù)測,發(fā)現(xiàn)豬囊尾

3、蚴sHSP有10個O-連糖基化位點.糖基化對蛋白質(zhì)的分子量有一定的影響,也對免疫活性有影響,且有糖基化程度越高影響越大的趨勢<'[1]>.同時預(yù)測其還有18個磷酸化位點,sHSP轉(zhuǎn)錄誘導(dǎo)活性的獲得可能依賴于其磷酸化,以往研究證實,sHSP的磷酸化位點通常位于幾個較為保守區(qū)域內(nèi)的絲氨酸和蘇氨酸殘基上,熱休克的程度越高,它們就越易被磷酸化,從而導(dǎo)致較高水平的轉(zhuǎn)錄誘導(dǎo),并能維持較長的時間<'[2]>.這說明糖基化、磷酸化作用在sHSP實現(xiàn)其生