枯草芽孢桿菌和豬源乳酸桿菌混合飼喂對(duì)新生仔豬先天免疫系統(tǒng)的影響.pdf

1、益生菌(Probiotic)是指對(duì)人和動(dòng)植物機(jī)體有益的細(xì)菌。這類細(xì)菌具有維持動(dòng)物消化道內(nèi)微生物的平衡，提高飼料利用率，防治疾病的作用，還可以刺激機(jī)體免疫細(xì)胞產(chǎn)生多種細(xì)胞因子，調(diào)節(jié)機(jī)體的特異性和非特異性免疫應(yīng)答，臨床上多用于預(yù)防和治療消化道疾病?？莶菅挎邨U菌和乳酸桿菌都是常用的益生菌，近年來發(fā)現(xiàn)枯草芽孢桿菌能影響小鼠糞便中乳酸桿菌的數(shù)量，但是對(duì)于在宿主腸道內(nèi)這兩種益生菌之間是否具有協(xié)同益生作用方面未見報(bào)道。本文以新生仔豬為試驗(yàn)對(duì)象，研究枯

2、草芽孢桿菌和豬源乳酸桿菌對(duì)新生仔豬腸道黏膜先天性免疫功能的影響，初步探討這兩種益生菌在體內(nèi)的協(xié)同刺激作用，以期為在養(yǎng)豬生產(chǎn)上的合理應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)和試驗(yàn)依據(jù)。
　　 1.枯草芽孢桿菌和豬源乳酸桿菌對(duì)仔豬小腸先天免疫相關(guān)細(xì)胞因子及β防御素-2mRNA表達(dá)水平的影響本試驗(yàn)選用40頭0日齡仔豬，隨機(jī)分為對(duì)照組(n=8)、商品日糧組(n=8)和三個(gè)試驗(yàn)組(n=24)。母乳喂養(yǎng)一周后，對(duì)照組和試驗(yàn)組開始飼喂無抗教槽料。試驗(yàn)組分別于0、7、

3、11、26日齡添加枯草芽孢桿菌（1.0×109 cfu/mL）、豬源乳酸桿菌(1.0×109cfu/mL)、枯草芽孢桿菌與豬源乳酸桿菌（體積比1∶1）1、2、3、5 mL/頭;對(duì)照組同時(shí)給予等量的蔗糖溶液;商品日糧組常規(guī)飼喂至試驗(yàn)結(jié)束。試驗(yàn)期4周，自由飲水及采食。28日齡時(shí)處死仔豬，采集十二指腸和回腸等樣品。應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量(Real-time PCR)檢測(cè)十二指腸和回腸中白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、腫瘤

4、壞死因子-α(TNF-α)三種細(xì)胞因子及β防御素-2(pBD-2)的基因表達(dá)。結(jié)果顯示，飼喂枯草芽孢桿菌能顯著提高十二指腸IL-6、TNF-α以及回腸IL-1β的基因表達(dá)量;飼喂豬源乳酸桿菌能顯著提高十二指腸IL-1β、TNF-α、pBD-2以及回腸IL-6、pBD-2的基因表達(dá)量;而同時(shí)飼喂枯草芽孢桿菌和豬源乳酸桿菌則可以顯著提高十二指腸和回腸IL-1β、IL-6以及十二指腸pBD-2的基因表達(dá)量。結(jié)果提示，同時(shí)飼喂枯草芽孢桿菌和豬源

5、乳酸桿菌能提高腸上皮細(xì)胞某些功能基因、細(xì)胞因子的表達(dá)，對(duì)腸道黏膜免疫具有積極地調(diào)節(jié)作用，從而增強(qiáng)宿主的防御能力。
　　 2.枯草芽孢桿菌和豬源乳酸桿菌對(duì)仔豬小腸局部TLRs表達(dá)水平的影響本試驗(yàn)主要從基因和蛋白水平研究枯草芽孢桿菌和豬源乳酸桿菌對(duì)仔豬小腸Toll樣受體-2(TLR-2)和TLR-9表達(dá)水平的影響。試驗(yàn)設(shè)計(jì)同上。28日齡時(shí)處死仔豬，采集十二指腸和回腸等樣品。分別應(yīng)用Real-time PCR和蛋白質(zhì)免疫印跡(West

6、ern-blot)檢測(cè)十二指腸和回腸中TLR-2和TLR-9的基因和蛋白表達(dá)水平。結(jié)果顯示，飼喂枯草芽孢桿菌、豬源乳酸桿菌或同時(shí)飼喂這兩種益生菌后，仔豬十二指腸TLR-2的基因和蛋白表達(dá)、回腸TLR-2的蛋白表達(dá)均顯著升高;而單獨(dú)飼喂豬源乳酸桿菌還能顯著提高回腸TLR-9的蛋白表達(dá)。此外，同時(shí)飼喂枯草芽孢桿菌和豬源乳酸桿菌還能顯著刺激十二指腸TLR-9的基因和蛋白表達(dá)以及回腸TLR-2的基因表達(dá)。結(jié)果提示，同時(shí)飼喂枯草芽孢桿菌和豬源乳酸

7、桿菌能顯著提高腸上皮細(xì)胞TLR-2和TLR-9的表達(dá)，從而直接增強(qiáng)免疫系統(tǒng)對(duì)病原微生物的清除能力，有效控制病原微生物的感染。
　　 3.枯草芽孢桿菌和豬源乳酸桿菌對(duì)仔豬腸道腸絨毛及IgA分泌細(xì)胞的影響本試驗(yàn)主要探討枯草芽孢桿菌和豬源乳酸桿菌對(duì)仔豬腸道腸絨毛發(fā)育及免疫球蛋白A(IgA)分泌細(xì)胞數(shù)量的影響。試驗(yàn)設(shè)計(jì)同上。28日齡時(shí)處死仔豬，采集十二指腸、空腸、回腸和結(jié)腸等樣品。應(yīng)用HE染色法檢測(cè)小腸各段腸絨毛的高度、寬度和隱窩深度的

8、變化，并用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)十二指腸、空腸、回腸和結(jié)腸中IgA分泌細(xì)胞數(shù)量的變化。結(jié)果顯示，單獨(dú)飼喂枯草芽孢桿菌能顯著提高回腸的腸絨毛高度、降低空腸和回腸的隱窩深度，并能提高各段腸道中IgA分泌細(xì)胞的數(shù)量;單獨(dú)飼喂豬源乳酸桿菌能顯著提高十二指腸和回腸的腸絨毛高度、降低空腸的隱窩深度;而同時(shí)飼喂枯草芽孢桿菌和豬源乳酸桿菌則能顯著提十二指腸和回腸的腸絨毛高度，以及降低空腸和回腸的隱窩深度。此外，與對(duì)照組相比，各處理組均能顯著提高十二指腸、

9、空腸和結(jié)腸中IgA分泌細(xì)胞的數(shù)量。結(jié)果提示，枯草芽孢桿菌或豬源乳酸桿菌在仔豬腸道中定植以后，可以極大地增加小腸內(nèi)壁表面積，提高吸收效率;并通過增加腸道各段IgA分泌細(xì)胞的數(shù)量提高小腸的局部體液免疫能力。
　　 4.枯草芽孢桿菌和豬源乳酸桿菌拮抗大腸桿菌對(duì)仔豬腸道上皮的影響為進(jìn)一步探討枯草芽孢桿菌和豬源乳酸桿菌對(duì)仔豬腸道的抗感染作用，本部分試驗(yàn)在前三個(gè)試驗(yàn)的研究基礎(chǔ)上，分別于32、34、36日齡給同時(shí)飼喂了枯草芽孢桿菌和豬源乳酸桿