2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、FOXL2是叉頭框轉(zhuǎn)錄因子家族成員之一,迄今已在多個物種中獲得了該基因的序列,然而較深入和系統(tǒng)的研究僅在高等哺乳動物中進(jìn)行,并確定其參與哺乳動物的卵巢早期發(fā)育、分化以及成體卵巢的功能維持,屬于雌性相關(guān)基因。目前,無脊椎動物中該基因的系統(tǒng)研究還很有限,且尚未見該基因作為無脊椎動物雌性特異基因的相關(guān)報(bào)道。
   本研究以重要的經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖物種——櫛孔扇貝(Chlamys farreri)為研究對象,克隆獲得了foxl2的cDNA全長序列

2、,分析了它的序列特征;半定量RT-PCR揭示了增殖期櫛孔扇貝各組織中的空間表達(dá);定量RT-PCR和原位雜交技術(shù)分析了該基因在個體發(fā)育過程及成體性腺周期中的表達(dá)特征;定量RT-PCR技術(shù)分析了外源17β-雌二醇對該基因表達(dá)的影響;初步探討了該基因在貝類中可能的功能。
   本研究獲得的櫛孔扇貝foxl2(Cf-foxl2) cDNA序列全長1824bp,編碼369個氨基酸,具有保守的叉頭框DNA結(jié)合區(qū)。保守區(qū)C端含NTL(細(xì)胞核定

3、位信號)序列(RRRRRMKR),蛋白三維結(jié)構(gòu)預(yù)測顯示,Cf-FOXL2叉頭框含3個α螺旋及2個翼狀結(jié)構(gòu)。
   RT-PCR結(jié)果顯示其主要在卵巢中表達(dá);其次在肝臟中有很微弱地表達(dá);在精巢及其他組織中無可見表達(dá);初步顯示其在精卵巢中的二態(tài)性表達(dá)特征。
   定量RT-PCR研究發(fā)現(xiàn),Cf-foxl2呈母源性表達(dá);在幼蟲結(jié)構(gòu)迅速建立的D形期幼蟲表達(dá)量較高,之后隨著幼蟲的發(fā)育,表達(dá)量顯著下降;至個體性別分化后表達(dá)量明顯上升。

4、原位雜交結(jié)果顯示陽性信號在擔(dān)輪幼蟲之前皆均勻分布;擔(dān)輪幼蟲出現(xiàn)信號集中,主要集中在腹面的口凹附近,對稱存在于蟲體兩側(cè);D形幼蟲時信號強(qiáng)度明顯增強(qiáng),除集中于內(nèi)臟團(tuán)外,在外套膜邊緣也有強(qiáng)信號出現(xiàn),之后信號漸弱直至消失;當(dāng)個體發(fā)育到9mm幼貝時,此時從性腺組織學(xué)上剛剛可以分辨雌雄,Cf-foxl2陽性信號僅在雌性生殖細(xì)胞及周圍的體細(xì)胞中出現(xiàn),在同時期的精巢中未見表達(dá);暗示該基因可能是櫛孔扇貝雌性性別表型形成的早期標(biāo)記基因,可能參與扇貝卵巢的分

5、化。
   比較Cf-foxl2mRNA在櫛孔扇貝成體性腺發(fā)育周期中精卵巢的定量RT-PCR結(jié)果發(fā)現(xiàn),Cf-foxl2在各時期卵巢中的表達(dá)均顯著高于同時期精巢中的表達(dá),呈明顯的性別二態(tài)性表達(dá)模式,其中增殖期卵巢是精巢表達(dá)量的63倍。在卵巢中,增殖期卵巢的表達(dá)量明顯高于生長期和成熟期,前者是后兩者的3倍,該表達(dá)規(guī)律與小鼠及青鳉等物種中foxl2的表達(dá)規(guī)律類似,推測與其在卵巢發(fā)育過程中的作用相關(guān)相關(guān);在精巢中,Cf-foxl2mRN

6、A僅在成熟期有非常微弱的表達(dá),增殖期與生長期的精巢中無明顯表達(dá)。成體性腺的原位雜交結(jié)果顯示,Cf-foxl2的陽性信號在各時期卵巢中的分布位點(diǎn)與其在幼貝雌性性腺中相同,但在成熟個體的精巢中除精子外的其它細(xì)胞(生殖細(xì)胞和體細(xì)胞)中也有微弱信號出現(xiàn);有趣的是,與胚胎、幼蟲和幼體不同,陰性探針在成體兩性性腺中均有表達(dá)信號,推測成體性腺中可能存在反義RNA,以調(diào)控foxl2基因的表達(dá)。
   采用閉殼肌注射外源17β-雌二醇的方法,檢測

7、其對Cf-foxl2表達(dá)的誘導(dǎo)發(fā)現(xiàn),成體卵巢與精巢中的Cf-foxl2表達(dá)量較對照組都有明顯提高(p<0.05),推測17β-雌二醇對該基因有反饋?zhàn)饔谩?br>   綜上,在結(jié)構(gòu)上,Cf-foxl2基因的叉頭框與已報(bào)道其它物種的foxl2基因叉頭框部位高度保守;其在個體發(fā)育中的表達(dá)圖式顯示該基因呈母源性表達(dá),是卵巢表型形成的早期標(biāo)記基因;其在成體中的表達(dá)模式與已報(bào)道的脊椎動物一樣,呈現(xiàn)明顯的性別二態(tài)性表達(dá);進(jìn)一步發(fā)現(xiàn),外源17β-雌二

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