標(biāo)記基因刪除系統(tǒng)的構(gòu)建及Bt殺蟲基因在轉(zhuǎn)基因水稻中的應(yīng)用.pdf

1、水稻（Oryza sativa）是我國(guó)最重要的糧食作物，其產(chǎn)量的高低直接關(guān)系著我國(guó)糧食安全問題。近年來，利用基因工程方法導(dǎo)入蘇云金桿菌(Bacillus thuringiensis，Bt)來源的殺蟲基因，培育水稻抗蟲新品種，已成為提高水稻產(chǎn)量的重要手段。
　　 在植物的遺傳轉(zhuǎn)化過程中，通常會(huì)借助編碼抗生素或除草劑抗性的標(biāo)記基因從大量的非轉(zhuǎn)化細(xì)胞中篩選出正確的轉(zhuǎn)化子，以保證轉(zhuǎn)化的高效率。然而，一旦獲得陽性轉(zhuǎn)基因植物，這些抗性基因的

2、存在就會(huì)變得多余，有可能給環(huán)境或人畜帶來某些潛在危害。因此，建立良好的標(biāo)記基因刪除體系，培育不帶標(biāo)記基因的轉(zhuǎn)基因作物逐漸發(fā)展為轉(zhuǎn)基因植物安全保障領(lǐng)域的一個(gè)重要研究課題。
　　 本研究在構(gòu)建標(biāo)記基因刪除系統(tǒng)及其應(yīng)用于轉(zhuǎn)Bt殺蟲基因水稻中有如下創(chuàng)新工作:
　　 1、以雙價(jià)抗蟲基因植物表達(dá)載體pCMUASV和位點(diǎn)特異性重組系統(tǒng)Cre/loxP為基礎(chǔ)，利用Red/ET重組技術(shù)成功構(gòu)建了兩個(gè)含標(biāo)記基因刪除系統(tǒng)的植物表達(dá)載體pLCM

3、UASV-napc和pLCMUASV-OsMc。
　　 2、應(yīng)用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將兩個(gè)植物表達(dá)載體導(dǎo)入到粳稻品種日本晴中，得到23個(gè)轉(zhuǎn)基因株系，經(jīng)PCR鑒定均為陽性，表明Bt殺蟲基因和標(biāo)記基因刪除系統(tǒng)已成功整合到水稻基因組中。
　　 3、15個(gè)轉(zhuǎn)基因株系的T1代種子進(jìn)行抗性萌發(fā)實(shí)驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示分離比例不符合孟德爾遺傳定律，表明在部分植株中潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶(hygromycin phosphotransferase，hpt)