茶皂甙對瘤胃發(fā)酵、甲烷產(chǎn)量及毒性機理研究.pdf

1、本實驗對粗茶皂甙進行分離提純，并且研究測定皂甙含量的最佳方法，再以提取茶皂甙和純品茶皂甙為試驗材料，研究其對甲烷產(chǎn)量和瘤胃發(fā)酵的影響；利用熒光定量PCR 技術(shù)分析檢測瘤胃微生態(tài)主要菌群的變化，并進一步研究茶皂甙的毒性機理。
　　 試驗一對粗茶皂甙（CTS）進行了分離提純，并研究了測定皂甙的最佳方法，經(jīng)測定粗茶皂甙的皂甙含量為40％，多糖含量為16％，正丁醇提取茶皂甙（BTS）的皂甙含量為70％，非皂甙活性物質(zhì)（OBC）的多糖含量

2、為80％。
　　 試驗二以分離得到的茶皂甙和純品茶皂甙為試驗材料，研究其對甲烷產(chǎn)量和瘤胃發(fā)酵的影響，并且利用熒光定量PCR 技術(shù)分析檢測瘤胃微生態(tài)主要菌群的變化，本部分分為兩個試驗，試驗1 添加0，1.71,3.43和8.68 mg/200 mg 底物的BTS，添加0.6，1.2和2.4 mg/200 mg 底物的OBC，6 mg/200 mg 底物的CTS 作為正對照，體外培養(yǎng)24小時后，取樣測定甲烷產(chǎn)量、瘤胃發(fā)酵指標(biāo)和微生物

3、數(shù)量。結(jié)果表明：在底物中添加CTS，BTS和OBC 對瘤胃pH、產(chǎn)氣量和揮發(fā)性脂肪酸沒有影響。但添加CTS和BTS提高了丙酸比例、降低了瘤胃氨氮濃度。添加BTS 線性和二次降低了甲烷產(chǎn)量，相反，添加OBC 線性提高了甲烷產(chǎn)量。BTS不影響甲烷菌的數(shù)量，但是OBC 顯著增加了甲烷菌數(shù)量，BTS 降低了原蟲的數(shù)量，且隨BTS的增加呈線性和二次下降。在底物中添加BTS和OBC 對原蟲和黃色瘤胃球菌的數(shù)量沒有影響，但是BTS 有降低產(chǎn)琥珀酸絲狀

4、桿菌的趨勢。試驗2 添加0，1.9,3.8和7.6 mg/200 mg 底物的PTS，同樣6 mg/200 mg 底物的CTS 作為正對照，同樣體外培養(yǎng)24小時后，取樣測定甲烷產(chǎn)量、瘤胃發(fā)酵指標(biāo)和微生物數(shù)量。結(jié)果表明：在底物中添加CTS 對產(chǎn)氣沒有影響，但是隨著PTS 添加量的增加，產(chǎn)氣量呈線性和二次下降。CTS和PTS 對瘤胃pH和乙酸比例沒有影響，但甲烷、氨氮含量和乙丙比卻顯著下降且隨PTS 添加量增加呈線性和二次下降。丙酸比例隨著

5、CTS和PTS的添加增加而增加。添加PTS 有增加總揮發(fā)性脂肪酸濃度的趨勢，但是隨著CTS和PTS的增加丁酸的比例卻降低。在底物中添加CTS和PTS可以降低原蟲和產(chǎn)琥珀酸絲狀桿菌的數(shù)量，且PTS 隨添加量的增加呈線性和二次下降，但是甲烷菌和真菌的數(shù)量沒有影響。CTS 對黃色瘤胃球菌的數(shù)量沒有變化，但是PTS 卻顯著降低了黃色瘤胃球菌的數(shù)量，且隨PTS 添加量的增加呈線性和二次降低。由此可見，在粗茶皂素中對甲烷產(chǎn)量和瘤胃發(fā)酵以及瘤胃微生物

6、起作用的是其中的皂甙組分，而非皂甙活性物質(zhì)有能增加甲烷產(chǎn)量作用。
　　 試驗三研究了純品茶皂素對小鼠的急性毒性實驗，試驗設(shè)8個處理，分別灌注0,2.64,3.1,3.65,4.3，5.06，5.95,7.0 g/kg小鼠體重的茶皂甙。由試驗結(jié)果可得，茶皂甙對ICR小鼠的半數(shù)致死量（LD50）為3.24 g/kg，且此半數(shù)致死量的可信限為2.86-3.54g/kg。LD5和LD95分別為1.87 g/kg和5.60 g/kg小鼠死