日糧中添加外源蛋白酶對(duì)斷奶仔豬內(nèi)源蛋白消化酶的影響.pdf

1、為了研究日糧中添加外源蛋白酶對(duì)斷奶仔豬內(nèi)源蛋白消化酶的影響，本試驗(yàn)采用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，將90頭23日齡斷奶仔豬按窩別體重隨機(jī)分配到3個(gè)日糧處理共6個(gè)區(qū)組中。三個(gè)日糧處理分別為基礎(chǔ)日糧不加外源蛋白酶（枯草桿菌蛋白酶AS1.398）的對(duì)照組(E0)、以及在基礎(chǔ)日糧的基礎(chǔ)上分別添加外源蛋白酶15，000U/kg、30，000U/kg的低酶組(E1)和高酶組(E2)。試驗(yàn)分期為斷奶后3天、1周和2周。試驗(yàn)主要研究了外源蛋白酶對(duì)斷奶仔豬生產(chǎn)性能、消

2、化器官生長發(fā)育、空腸和胰腺消化酶活性、空腸液和胰腺蛋白酶酶譜、胰腺蛋白消化酶mRNA以及十二指腸粘膜CCKmRNA等的影響。具體共分五部分:
　　 1試驗(yàn)用中性蛋白酶性質(zhì)的研究
　　 通過體外試驗(yàn)研究了pH、Ca2+濃度、0.1％SDS、2.5％TritonX-100對(duì)外源蛋白酶活性的影響，并通過底物SDS-PAGE法測定了其分子量范圍，利用常規(guī)胰蛋白酶和糜蛋白酶測定方法鑒定其是否有這些內(nèi)源酶的活性。研究表明，外源中性蛋

3、白酶在pH3.0-7.0之間持續(xù)上升，最大活性為pH7.0; pH3.0-5.0之間活性最低且上升緩慢，活性為最大活性的5％-10％，但將低pH環(huán)境作用后的體系pH升高到7.0后，活性線性上升，大約提高5-10倍，pH4.0-5.0已基本復(fù)性。0.1％SDS環(huán)境中外源蛋白酶活性約為正?；钚缘?0％，但加入2.5％TritonX-100后活性回復(fù)到77％。Ca2+濃度為5mmol/L時(shí)活性最高，約為正?；钚缘?.3倍。用內(nèi)源蛋白酶特異性活

4、性測定方法測定外源蛋白酶表明，外源蛋白酶具有一定胰蛋白酶活性，隨外源酶的增多胰蛋白酶活性也升高;但外源酶未檢測到糜蛋白酶活性。底物SDS-PAGE法測定表明，外源蛋白酶為一混合物，其分子量范圍在45kD以上。
　　 2日糧添加外源蛋白酶對(duì)斷奶仔豬生產(chǎn)性能及消化系統(tǒng)生長發(fā)育的影響
　　 本試驗(yàn)研究了日糧中添加外源蛋白酶對(duì)斷奶仔豬生產(chǎn)性能以及消化器官生長發(fā)育的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧中添加蛋白酶對(duì)第一周的生產(chǎn)性能沒有影響，但

5、對(duì)第二周的日增重顯著降低，高酶組日耗料顯著降低，但高酶組和低酶組料肉比均沒有顯著差異。兩個(gè)加酶組小腸重7天時(shí)均顯著低于對(duì)照組，但14天時(shí)只有高酶組降低。低酶組胰腺重7天時(shí)最高，但14天時(shí)卻最低。日糧中添加蛋白酶后空腸pH顯著升高，胃pH有降低的趨勢。
　　 3日糧中添加外源蛋白酶對(duì)斷奶仔豬內(nèi)源消化酶活性及消化產(chǎn)物的影響
　　 本試驗(yàn)研究了日糧中添加外源蛋白酶對(duì)斷奶仔豬腸道、胰腺內(nèi)源消化酶活性以及回腸、血液生化物質(zhì)的影響。

6、試驗(yàn)結(jié)果表明，兩個(gè)加酶組空腸前段脂肪酶活性均顯著降低，胰蛋白酶均升高。兩個(gè)加酶組空腸前段總蛋白酶活性在斷奶后3天均降低，但14天時(shí)高酶組蛋白酶活性高于對(duì)照組?？漳c前段糜蛋白酶活性在斷奶后3、7天均未受影響，但14天時(shí)呈線性降低。日糧中添加蛋白酶顯著降低了斷奶后14天時(shí)空腸后端糜蛋白酶的活性，對(duì)其它四種酶的活性無顯著影響。兩個(gè)加酶組胰腺糜蛋白酶活性在仔豬斷奶后3、7天未受影響，但高酶組在斷奶后14天顯著降低;只有在斷奶后7天時(shí)高酶組胰腺脂

7、肪酶活性表現(xiàn)出顯著降低。高酶組胰蛋白酶活性表現(xiàn)出升高的趨勢。日糧中添加外源蛋白酶顯著降低了高酶組回腸液中水溶性蛋白質(zhì)水平，但游離氨基酸水平未有明顯變化。兩個(gè)加酶組血清游離氨基酸濃度均降低，低酶組游離脂肪酸水平顯著降低。本試驗(yàn)表明，日糧中添加高水平外源蛋白酶后胰腺、空腸各種消化酶活性表現(xiàn)不一致，回腸水溶性蛋白減少但氨基酸濃度未提高，且血液氨基酸降低。
　　 4日糧中添加外源蛋白酶對(duì)斷奶仔豬內(nèi)源蛋白消化酶酶譜的影響
　　 本

8、試驗(yàn)對(duì)斷奶仔豬空腸前后段食糜和胰腺蛋白酶酶譜以及日糧中添加外源蛋白酶對(duì)其的影響進(jìn)行了研究。試驗(yàn)表明，仔豬斷奶后兩周內(nèi)空腸內(nèi)源蛋白酶酶譜共有7條主要的蛋白酶條帶，計(jì)算分子量由大到小分別為:42.8、40.2、37.5、35.6、33.1、31.2、18.4 KDa（條帶1～7）;反應(yīng)條件相同且底物充足時(shí)條帶1水解酪蛋白效率最高，約占全部條帶水解能力的60％，其次為條帶4（斷奶后7天）或條帶7（斷奶后14天）;最低為條帶6，約占總水解能力的

9、4％。胰腺蛋白酶酶譜共有10條主要條帶，計(jì)算分子量由大到小分別為158.2、133.4、114.7、63.9、54.8、49.7、45.4、41.6、38.9、25.4（條帶1～10）。經(jīng)鑒定空腸食糜酶譜中的條帶7（分子量18.4 KDa）和胰腺酶譜中的條帶10（分子量25.4）均為胰蛋白酶。日糧中添加外源蛋白酶提高了斷奶仔豬空腸前段高酶組條帶1和條帶7的光密度，降低了斷奶后14天空腸后段高酶組條帶6的光密度，提高了斷奶后14天空腸后段

10、高酶組條帶7的光密度。胰腺酶譜中條帶10因外源蛋白酶添加而顯著提高，條帶3在斷奶后7天和14天表現(xiàn)不同，7天時(shí)高酶組顯著低于對(duì)照組，而14天時(shí)則顯著高于對(duì)照組。
　　 5日糧中添加外源蛋白酶對(duì)斷奶仔豬胰腺蛋白酶、十二指腸粘膜CCKmRNA水平的影響
　　 本試驗(yàn)研究了日糧中添加外源蛋白酶對(duì)斷奶仔豬胰腺胰蛋白酶、糜蛋白酶以及十二指腸粘膜中CCK基因表達(dá)的影響。日糧中添加外源蛋白酶后，高酶組胰蛋白酶mRNA水平在仔豬斷奶后3

11、、7天顯著降低，而在斷奶后14天卻顯著升高;低酶組在仔豬斷奶后3、7天與對(duì)照組無顯著差異，但14天也顯著高于對(duì)照組。仔豬斷奶后14天，兩個(gè)加酶組線性升高。高酶組糜蛋白酶mRNA在仔豬斷奶后7、14天均顯著升高。兩個(gè)加酶組十二指腸粘膜CCK mRNA在仔豬斷奶后14天均顯著升高。
　　 綜上所述，本研究結(jié)論:
　　 1)日糧中添加高水平外源蛋白酶可使斷奶仔豬生產(chǎn)性能顯著降低;
　　 2)日糧中加入外源蛋白酶可使空腸

12、內(nèi)源蛋白酶比例失調(diào)，影響日糧中蛋白質(zhì)在腸道的充分消化;
　　 3)日糧中添加高水平外源蛋白酶能夠促進(jìn)動(dòng)物胰腺胰蛋白酶的合成，降低糜蛋白酶合成。對(duì)胰蛋白酶合成，基因轉(zhuǎn)錄層次調(diào)控起重要作用，而對(duì)糜蛋白酶合成，除了基因轉(zhuǎn)錄層次調(diào)控外，還存在轉(zhuǎn)錄后調(diào)控，這一調(diào)控可能與血液氨基酸含量降低有關(guān);CCK mRNA水平與這兩種酶mRNA水平有相似的變化趨勢;
　　 4)高水平外源蛋白酶能夠促進(jìn)胰蛋白酶外分泌，小腸后段回腸閘機(jī)制可能是主要