海洋蝦殼的放線菌分離鑒定篩選及抑菌活性物質(zhì)提取.pdf

1、本研究從海產(chǎn)蝦殼上分離放線菌并進(jìn)行產(chǎn)幾丁質(zhì)酶、蛋白酶菌株及拮抗菌株的篩選,最終篩選得到兩株有較強(qiáng)抑真菌活性的菌株T0907-15和T0907-107,并對(duì)其進(jìn)行種的鑒定。選取菌株T0907-107進(jìn)行所產(chǎn)抑菌活性物質(zhì)的理化性質(zhì)、發(fā)酵培養(yǎng)基、發(fā)酵培養(yǎng)條件的優(yōu)化及抑菌活性物質(zhì)浸提方法的研究,主要結(jié)果如下:
　　 1、通過對(duì)海產(chǎn)蝦殼前處理,利用選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行放線菌的分離,根據(jù)放線菌菌落基內(nèi)菌絲、氣生菌絲顏色和可溶性色素有或無等特征,

2、對(duì)分離的放線菌進(jìn)行初步歸類,排除重復(fù)的菌株后,編號(hào)登記,從海產(chǎn)蝦殼中共分離到167株放線菌。
　　 2、通過平板透明圈篩選法,獲得的放線菌進(jìn)行產(chǎn)幾丁質(zhì)酶和產(chǎn)蛋白酶的菌株篩選；拮抗菌株采用平板對(duì)峙法初篩和發(fā)酵液杯碟法復(fù)篩,篩選到兩株對(duì)多種植物病原真菌有較強(qiáng)拮抗作用的菌株(T0907-15和T0907-107)。基于其形態(tài)特征、培養(yǎng)性狀及生理生化特征及16S rDNA序列的聚類結(jié)果分析,將2菌株分別歸屬于鏈霉菌淡紫灰類群的鏈素淡紫灰

3、鏈霉菌(Streptomyces lavendulae streptinus)和輪生類群的藤黃輪絲鏈霉菌(Streptomyces luteoverticillatus)。
　　 3、對(duì)拮抗菌株T0907-107所產(chǎn)抑菌活性物質(zhì)進(jìn)行分離并測定其理化性質(zhì),結(jié)果表明,該活性物質(zhì)對(duì)多種病原真菌具有抑制作用,顯示較廣的抗菌譜,是一類耐熱(60℃處理90 min)、耐酸堿(pH值2～11)、穩(wěn)定性強(qiáng)(自然光照射20 h及紫外光照射60mi

4、n后仍具一定穩(wěn)定性)、貯藏性好的非蛋白質(zhì)類的強(qiáng)極性的物質(zhì)。
　　 4、通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn),對(duì)菌株T00907-107的發(fā)酵培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化,確定了拮抗菌株T0907-107液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方及適宜培養(yǎng)條件。其中,培養(yǎng)基各組分的最佳配比為:蔗糖1.0％,黃豆粉1.0％；發(fā)酵條件為:初始pH值7.0,溫度30℃,發(fā)酵時(shí)間84～156h,接種量(體積分?jǐn)?shù))2％,裝液量(200～250mL)／500mL。
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