鴨瘟病毒TK基因轉(zhuǎn)錄與表達時相及TK重組蛋白ELISA方法的建立和應用.pdf

1、本文對本研究小組前期鑒定、表達出的鴨瘟病毒(Duck plague virus, DPV)胸苷激酶(Thymidine Kinase, TK)基因、TK重組蛋白展開了以下系列研究：DPV TK基因在鴨胚成纖維細胞(Duck Embryo Fibroblast， DEF)中的轉(zhuǎn)錄與表達時相分析；TK重組蛋白作為包被抗原建立TK-ELISA檢測DP抗體。結(jié)果如下：
　　 1.熒光定量PCR(FQ-PCR)與蛋白印跡(Western-

2、blot)分析DPV TK基因的轉(zhuǎn)錄與表達時相。轉(zhuǎn)錄時相顯示DPV TK基因最早在感染后30min開始轉(zhuǎn)錄，隨后轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物量迅速增加，并于感染后4h達到高峰，36h后其相對含量下降到一定水平，72h轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物極少；表達時相顯示感染后從6h開始大量表達，8h達到表達的高峰，隨后持續(xù)下降直到48h。轉(zhuǎn)錄與表達時相共同證明TK基因具備皰疹病毒早期基因的典型特征。
　　 2.TK重組蛋白作為包被抗原建立TK-ELISA方法。結(jié)果表明，最佳包

3、被抗原稀釋倍數(shù)、血清稀釋倍數(shù)、酶標二抗稀釋倍數(shù)分別為：2.5μg/100μ1(1:200)、1:80及1：2000。通過用建立的TK-ELISA檢測鴨病毒性肝炎病毒(DHV)、鴨乙型肝炎病毒(DHBV)、鴨疫里默氏菌(R.A)、鴨大腸桿菌(E.coli)、鴨沙門氏菌(S.anatum)血清，并與鴨瘟病毒(DPV)血清對照，顯示出TK-ELISA具有良好的特異性。對一份鴨陽性血清做梯度稀釋，依照臨界值(0.401)，最大能檢測出1：256