四川省食品動(dòng)物源性大腸桿菌耐藥性監(jiān)測(cè)及整合子——基因盒檢測(cè).pdf

1、伴隨著抗菌藥物在獸醫(yī)臨床的廣泛使用，耐藥菌株迅速出現(xiàn)，多重耐藥現(xiàn)象十分普遍，已經(jīng)引起全世界的廣泛關(guān)注。做好耐藥性監(jiān)測(cè)，從而指導(dǎo)獸醫(yī)臨床合理用藥已刻不容緩。對(duì)于細(xì)菌耐藥性檢測(cè)，傳統(tǒng)的方法主要是進(jìn)行耐藥表型監(jiān)測(cè)，隨著分子生物技術(shù)的發(fā)展，PCR技術(shù)在耐藥基因型的檢測(cè)及新耐荮機(jī)制的發(fā)現(xiàn)方面發(fā)揮著重要的作用。
　　 本研究首先從四川省不同養(yǎng)殖場(chǎng)收集食品動(dòng)物源大腸桿菌病樣本，按常規(guī)的細(xì)菌分離鑒定方法進(jìn)行大腸桿菌菌株的鑒定。按照CLSI推薦方

2、法及結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn),應(yīng)用微量肉湯稀釋法測(cè)定細(xì)菌對(duì)于不同抗菌藥物的最小抑菌濃度(MIC)，從而對(duì)四川省食品動(dòng)物源大腸桿菌的耐藥情況進(jìn)行監(jiān)測(cè)。對(duì)于多重耐藥菌株，采用多重PCR技術(shù)對(duì)其攜帶的3類整合子進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)對(duì)整合子陽(yáng)性菌株進(jìn)行基因盒分析。本次研究分2部分完成。1.不同食品動(dòng)物源性大腸桿菌耐藥性的監(jiān)測(cè)
　　 從四川不同地區(qū)規(guī)模較大的養(yǎng)殖場(chǎng)收集食品動(dòng)物源(雞源、鴨源、牛源、豬源)大腸桿菌病樣本，分離鑒定出705株大腸桿菌。采用微量肉

3、湯稀釋法進(jìn)行了25種抗菌藥物的藥敏實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示：705株大腸桿菌對(duì)25種抗菌藥物表現(xiàn)出程度不同的耐藥性，特別是對(duì)獸醫(yī)臨床長(zhǎng)期使用的甲氧芐啶、復(fù)方新諾明、利福平的耐藥率接近100％;其次足對(duì)氨芐西林、四環(huán)素、氯霉素、氟喹諾酮類藥物的耐藥率均超過了70％;對(duì)頭孢唑啉、頭孢噻吠、頭孢曲松也表現(xiàn)出一定的耐藥性，耐藥率分別為34.34％、41.30％、26.25％，但中介率較高，可見大腸樸菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類藥物存在耐藥率上升的趨勢(shì)；本次監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)所

4、有大腸桿菌只有對(duì)阿米卡星保持有一定的敏感性，敏感率超過67％。
　　 多重耐約性分析顯示，705株菌均為多重耐藥菌株，主要表現(xiàn)出15～24耐，在各種耐約譜型中，23耐菌株所占比率最大，其次為21耐。不同動(dòng)物源菌株耐藥性比較顯示，禽源菌株的耐藥情況較豬源菌株，牛源菌株嚴(yán)重。不同地區(qū)來源菌株耐藥性比較可見，不同地區(qū)來源菌株對(duì)所檢測(cè)的25種約物耐藥性分布大體一致，對(duì)部分藥物表現(xiàn)出一定地域差異。2.食品動(dòng)物源性大腸桿菌的整合子-基因盒檢

5、測(cè)
　　 采用多重PCR方法同時(shí)擴(kuò)增327株大腸桿菌髂合酶Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型基因。多重PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，在327株菌株中，294株細(xì)菌攜帶有Ⅰ型整合酶基因，其檢出率為89.91％，本次檢測(cè)未發(fā)現(xiàn)攜帶有Ⅱ型和Ⅲ型整合酶基因的菌株。隨機(jī)抽?、裥驼厦戈?yáng)性菌株81株，進(jìn)行基因盒擴(kuò)增，擴(kuò)增結(jié)果顯示14株Ⅰ型整合酶陽(yáng)性菌株未擴(kuò)增出基因盒片段，其余67株擴(kuò)增出845bp～2731bp的基因盒片段。測(cè)序結(jié)果顯示，67株菌中含有6種不同類型的基