烏桕離體再生與農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因技術(shù)研究.pdf

1、烏桕(Sapium sebiferum Roxb.)是我國(guó)重要的木本油料樹種,其種子富含油份。由于烏桕對(duì)氣候、海拔及土壤要求不高,且烏桕梓油制備的生物柴油質(zhì)量好,因此,烏桕是非常具有潛力的生物質(zhì)能源資源之一。為了利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)對(duì)烏桕進(jìn)行遺傳改良,我們研究了細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素對(duì)烏桕離體再生的影響,并在此基礎(chǔ)上研究了通過(guò)根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)方法將擬南芥ATFATB1基因轉(zhuǎn)入烏桕細(xì)胞中的轉(zhuǎn)基因技術(shù),主要獲得了以下結(jié)果:
　　 1.成熟的烏桕

2、種子在75％的乙醇消毒3 min后、再在20％NaClO溶液中消毒40 min,除菌效果最好,在MS培養(yǎng)基上無(wú)菌萌發(fā)率為86％。
　　 2.含2.0 mg/L BA、0.5 mg/L NAA和1.0 g/L活性炭的MS培養(yǎng)基為誘導(dǎo)烏桕下胚軸形成不定芽的最佳培養(yǎng)基,不定芽誘導(dǎo)率為82.4％;含1.0 mg/L BA和0.2 mg/L NAA的培養(yǎng)基為子葉和真葉不定芽誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基,其誘導(dǎo)率分別為65.7％和50％。
　　

3、 3.將不定芽伸長(zhǎng)的幼莖切成帶側(cè)芽或者頂芽的小段、接種在含0.2 mg/L BA的MS培養(yǎng)基上,94％的莖段可以形成新的幼莖。
　　 4.烏桕不定芽或者幼莖在含0.5 mg/L IBA和1.0 g/L活性炭的MS培養(yǎng)基生根效果最好,達(dá)到100％,生根的植株經(jīng)煉苗、移栽后,生長(zhǎng)正常。
　　 5.卡那霉素敏感試驗(yàn)證明,烏桕下胚軸外植體對(duì)卡那霉素的敏感臨界濃度為30 mg/L。
　　 6.利用RT-PCR克隆了擬南芥脂

4、肪酸合成途徑中重要基因ATFATB1,并構(gòu)建了CaMV35S啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的組成型表達(dá)載體,并將其導(dǎo)入根癌農(nóng)桿菌EHA105菌株中。
　　 7.將烏桕下胚軸切成0.5 cm長(zhǎng)的小段,然后對(duì)切,在根癌農(nóng)桿菌菌液中浸泡30min,然后轉(zhuǎn)至含2.0mg/LBA、0.5 mg/LNAA和200μM AS的共培養(yǎng)基上培養(yǎng)三天,再轉(zhuǎn)移到含2.0 mg/L BA、0.5 mg/LNAA、1.0 g/L活性炭、30 mg/L:Kan和100 mg/