小麥的轉(zhuǎn)基因研究和兩種荒漠植物的離體再生.pdf

1、第一部分用基因槍和花粉管法將水稻幾丁質(zhì)酶基因?qū)胄←湹难芯?以預(yù)培養(yǎng)3~4d的冬小麥西農(nóng)88、寶豐7228<'r>、西農(nóng)1376、80101和甘麥開花授粉8~15d后的未成熟幼胚(大小為0.5~2.0mm)為材料,利用PDS1000/氦氣基因槍將水稻幾丁質(zhì)酶基因?qū)胄←溣着叨芷?將用質(zhì)粒pYAO24(克隆有水稻幾丁質(zhì)酶基因RC24和選擇標(biāo)記基因nptⅡ)轟擊的小麥幼胚轉(zhuǎn)至附加50mg/L硫酸卡那霉素的培養(yǎng)基上進(jìn)行多步驟篩選和分化,從86

2、3個幼胚中獲得2株綠苗;將用質(zhì)粒pARN6(克隆有水稻幾丁質(zhì)酶基因RC24)和質(zhì)粒pD(克隆有β-葡萄苷酸酶基因gus和選擇標(biāo)記基因bar)共轟擊的小麥幼胚轉(zhuǎn)至附加2mg/L除草劑Basta的培養(yǎng)基上進(jìn)行多步驟篩選和分化,從388個幼胚中獲得4株綠苗.對篩選后的6株綠苗進(jìn)行PCR和Southern雜交分析.然后觀察和記錄經(jīng)過分子鑒定為轉(zhuǎn)化植株的T0代植株的株高、莖粗、穗長、節(jié)數(shù)、分蘗數(shù)、株籽粒數(shù)、平均穗籽粒數(shù)及千粒重等形態(tài)表型和性狀表現(xiàn)

3、.同時對T1代轉(zhuǎn)化植株和對照植株進(jìn)行田間條銹菌的接種試驗,觀察和記錄其抗病情況.第二部分兩種荒漠植物的組織培養(yǎng)及植株再生;以駱駝蓬(Peganum harmala L.)無菌苗下胚軸切段和子葉切塊為材料，在不同的培養(yǎng)基上進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo),發(fā)現(xiàn)在MS基本培養(yǎng)基附加2.0mg/L2,4-D、0.5mg/L 6-BA和3﹪蔗糖時,可100﹪的誘導(dǎo)出愈傷組織.以半日花(Helianthemum Songaricum Schrenk)無菌苗下胚