絲瓜種質(zhì)資源遺傳多樣性的ISSR分析.pdf

1、絲瓜，屬葫蘆科，絲瓜屬，生產(chǎn)上分為普通絲瓜(Luffa cylindrical(L.) Roem)和有棱絲瓜(Luffa acutangula(L.) Roxb)兩個栽培種。絲瓜在我國南北均有栽培，以嫩果供食用，瓜肉細膩柔軟，味道鮮美，是我國主要的夏季蔬菜之一?，F(xiàn)有的研究主要集中在栽培、常規(guī)育種、藥用成分提取分析、加工工藝上，在分子生物學方面的研究比較少。本試驗旨在初步的探討絲瓜的遺傳多樣性研究及分子水平育種的初期研究，以國內(nèi)收集的30

2、份絲瓜品種為試驗材料，進行ISSR-PCR分子標記技術(shù)，探討絲瓜的分類和遺傳多樣性，得出的主要結(jié)論如下： 1.針對絲瓜富含酚類化合物和多糖等物質(zhì)導致DNA提取和純化困難的問題，改良了傳統(tǒng)的CTAB法，從絲瓜幼苗葉片中，獲得質(zhì)量比較高的絲瓜DNA，經(jīng)檢測適于ISSR-PCR擴增。 2.建立、優(yōu)化了絲瓜ISSR-PCR反應的技術(shù)體系。在20μL的反應體系中，TaqDNA聚合酶的用量為1.5 U，引物濃度為0.4μmol/L，

3、dNTP的濃度為250μmol/L，模板DNA濃度為30 ng/反應，10×Buffer2μL。按照此體系，在94℃預變性5 min，94℃變性30 s，在最適退火溫度下退火45 s，72℃延伸90 s，進行35個循環(huán)，循環(huán)結(jié)束后72℃延伸10 min，4℃保存。該體系擴增出的條帶清晰，效果良好，適宜ISSR分析。 3.在供試驗的99個引物中，篩選出16個適于絲瓜進行ISSR擴增的多態(tài)性高、擴增條帶清晰的引物，對30份絲瓜材料進

4、行了ISSR分析。共擴增出166條帶，其中多態(tài)性為144條，多態(tài)性比率為86.75％。同時，研究中發(fā)現(xiàn)16條ISSR引物中，序列含(AG)n、(CA)n的引物所占比例高達30％以上，說明絲瓜基因組中微衛(wèi)星(TC)n、(GT)n含量豐富。 4.依據(jù)ISSR分析結(jié)果，對供試的30個品種進行聚類分析，在遺傳相似系數(shù)GS值在0.313～0.951之間，平均為0.769，遺傳相似性較高。在GS=0.313處分為兩類，第一類為普通絲瓜，第二