黃芩毛狀根培養(yǎng)體系的研究-Ⅱ.pdf

1、黃芩（Scutellaria baicalensis Georgi）為唇形科草本植物，是一味傳統(tǒng)的常用中藥。主產(chǎn)于河北、遼寧、陜西、山東、內(nèi)蒙古等地。其根性寒，味苦，有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎等功效。現(xiàn)代藥理研究表明其主要有效成分黃芩苷（baicalin）具有抗腫瘤、抗HIV等作用。以其開發(fā)新的藥物前景將十分廣闊，但因黃芩為多年生草本植物，生長較慢，限制黃芩產(chǎn)品深度開發(fā)。利用現(xiàn)代生物技術(shù)建立黃芩毛狀根培養(yǎng)體系是解決中藥資源可持續(xù)發(fā)

2、展的有效途徑之一。
　　 本論文主要對黃芩毛狀根培養(yǎng)、黃芩苷積累規(guī)律、黃芩毛狀根放大培養(yǎng)及高效液相法測定黃芩毛狀根中黃芩苷含量等相關(guān)內(nèi)容進(jìn)行了研究。研究結(jié)果如下：
　　 1.高效液相色譜法測定黃芩毛狀根中黃芩苷含量的色譜條件為：色譜柱：化學(xué)鍵合型十八烷基柱（SciC18色譜柱）；流動相：甲醇：水：磷酸=50：50：0.2；檢測波長274nm；柱溫：室溫；流速：1mL/min。在該條件下，黃芩苷的保留時間為9min，在12

3、～72μg/mL內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9992），平均加樣回收率為99.32％，RSD=1.36％。
　　 2.分別以蔗糖、葡萄糖和果糖為碳源研究了碳源對黃芩毛狀根的生長和黃芩苷積累的影響。研究表明：三種碳源，黃芩毛狀根生長曲線均呈“S”型；蔗糖最有利于黃芩毛狀根生物量的積累，生長量（干重）最高達(dá)13.1g/L，黃芩苷含量為8.16％；果糖最適合黃芩苷的合成，黃芩苷含量最高達(dá)10.66％，生長量為11.4g/L。
　　

4、 3.溫度對黃芩毛狀根培養(yǎng)的影響研究表明：28℃培養(yǎng)，有利于生物量積累，最高達(dá)12.80g/L（干重），20℃培養(yǎng)明顯有利于黃芩苷的積累，黃芩苷含量最高達(dá)8.80％。毛狀根的最大生物量和次生代謝產(chǎn)物積累并不在同一溫度。通過對變溫培養(yǎng)條件優(yōu)化研究結(jié)果顯示，毛狀根的最大生物量和次生代謝產(chǎn)物積累均有較大提高，結(jié)果：毛狀根生長量（干重）為13.3g/L，黃芩苷含量為12.58％，黃芩苷產(chǎn)量為1.62g/L，其產(chǎn)量比28℃恒溫培養(yǎng)提高了66.34

5、％。
　　 4.分別研究了誘導(dǎo)子、激素、前體及補(bǔ)加培養(yǎng)基對黃芩毛狀根中黃芩苷產(chǎn)量的影響。研究表明：以黑曲霉誘導(dǎo)子和米曲霉誘導(dǎo)子濃度為40mg/L和20mg/L時，CO2+濃度為15.3×10-5mmol/L時，黃芩苷產(chǎn)量較對照培養(yǎng)分別提高了9.18％、10.20％和13.27％；生長素NAA和細(xì)胞分裂素6-BA的濃度為0.4mg/L和0.2mg/L時，黃芩苷產(chǎn)量較對照培養(yǎng)分別提高了25.74％和24.75％；添加0.4mmol/

6、L的苯丙氨酸，黃芩苷產(chǎn)量較對照培養(yǎng)提高了36.63％；補(bǔ)加培養(yǎng)基后毛狀根培養(yǎng)至70d，黃芩苷產(chǎn)量較對照培養(yǎng)提高了56.44％。
　　 5.黃芩毛狀根放大培養(yǎng)的初步研究表明，毛狀根在氣升反應(yīng)裝置中能迅速生長，并有效富集黃芩苷。氣升培養(yǎng)55d時，黃芩苷產(chǎn)量較搖床培養(yǎng)下降了22.41％，提示培養(yǎng)方式的改變對黃芩苷的的積累有一定的影響，需對放大培養(yǎng)條件進(jìn)行深入研究。
　　 通過對黃芩毛狀根生長和黃芩苷積累的研究，建立了黃芩毛狀根