典型抗生素菌渣殘留效價(jià)檢測(cè)方法及其利用的初步研究.pdf

1、隨著抗生素產(chǎn)量增多，抗生素菌渣的處理問題已逐漸成為了限制制藥業(yè)發(fā)展的重要問題。由于菌渣中的殘留效價(jià)會(huì)引發(fā)耐藥風(fēng)險(xiǎn)，故抗生素菌渣已被列為危廢。本論文選擇土霉素和桿菌肽為典型,通過對(duì)菌渣樣品前處理?xiàng)l件（提取、凈化）及色譜條件（色譜柱、柱溫、流動(dòng)相、檢測(cè)波長(zhǎng)）的優(yōu)化，建立檢測(cè)菌渣中殘留效價(jià)的方法,并以桿菌肽菌渣為研究對(duì)象,探究了抗生素菌渣用作飼料添加劑的可行性。
　　對(duì)于土霉素菌渣，用甲醇/冰乙酸提取土霉素，采用分散固相萃取技術(shù)，用GC

2、B和C18各50mg及1mgNaSO4作為吸附藥劑凈化樣品，色譜條件為：PLRP-S色譜柱分離，柱溫30℃，流動(dòng)相為甲醇/0.05mol/L草酸，檢測(cè)波長(zhǎng)為355nm，結(jié)果顯示，土霉素在0.1~2000mg/L范圍內(nèi)線性良好，回收率為86.86~97.33％，RSD為2.45~4.38%，LOD和LOQ分別為0.0506和0.1533，所建立的方法簡(jiǎn)單有效。在此基礎(chǔ)上，建立了土霉素三種降解產(chǎn)物E-OTC、α-OTC與β-OTC的檢測(cè)方法

3、。E-OTC是OTC的同分異構(gòu)體，結(jié)構(gòu)和性質(zhì)相似，因此采用與OTC相同的提取和凈化方式。檢測(cè)E-OTC的色譜條件為：PLRP-S色譜柱分離，流動(dòng)相選用乙腈/0.2%甲酸水，檢測(cè)波長(zhǎng)270nm。α-OTC與β-OTC是同分異構(gòu)體，結(jié)構(gòu)性質(zhì)相似，可一同提取、凈化和檢測(cè)，提取劑選用甲醇/冰乙酸/0.02mol/LNa2EDTA，用Waters Sep-Pak C18固相萃取柱凈化提取液，甲醇、超純水、Na2EDTA溶液活化小柱，5ml超純水淋

4、洗，2ml甲醇和1ml乙酸乙酯洗脫，檢測(cè)α-OTC與β-OTC的色譜條件為：PLRP-S色譜柱分離，甲醇/乙腈/磷酸鹽緩沖溶液(pH=8)為流動(dòng)相，波長(zhǎng)為254nm。經(jīng)檢測(cè)，E-OTC、α-OTC和β-OTC的回收率分別為75.98~84.73%、59.22~76.76%和63.91~72.57%，RSD分別為2.23~4.26%、2.12~4.85%、2.79~5.04%，LOD和LOQ分別為0.0658~0.0774和0.1990~

5、0.2346。
　　對(duì)于桿菌肽菌渣，用甲醇/0.1%甲酸水提取桿菌肽A，加入乙腈除蛋白，用正己烷進(jìn)行二次除脂，然后過Oasis HLB固相萃取柱，5ml甲醇和5ml超純水活化，3ml超純水淋洗，3ml甲醇洗脫。檢測(cè)桿菌肽A的色譜條件為：Aglient TC-C18色譜柱分離，流動(dòng)相為0.1%甲酸乙腈和0.1%甲酸水，柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)254nm。經(jīng)檢測(cè)，桿菌肽A在0.1~1000mg/L范圍內(nèi)相關(guān)系數(shù)是0.9997，呈良好線性，

6、回收率為87.89~97.33%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.05%~5.18%。最后探究了桿菌肽菌渣用作飼料添加劑的可行性。對(duì)桿菌肽菌渣進(jìn)行成分分析，將菌渣中常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分含量及各氨基酸含量與幾種常規(guī)飼料對(duì)比，表明菌渣中的營(yíng)養(yǎng)成分符合飼料水平，且菌渣中有毒重金屬含量均低于規(guī)定的最大允許值，屬無毒產(chǎn)品。在此基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)并優(yōu)化了菌渣制備飼料添加劑的工藝。最后對(duì)菌渣中的耐藥基因進(jìn)行了檢測(cè)，檢測(cè)到菌渣中含有bcrB基因，雖然bcrB基因單獨(dú)存在時(shí)不足以引發(fā)