小鼠細(xì)胞色素ccyt-c試劑盒elisa

1、Address:KenhG.Howell748NickelRoadSanFrancisco(415)CA94104Telephone:0014159141567小鼠細(xì)胞色素小鼠細(xì)胞色素C（CytCCytC）試劑盒試劑盒（ELISAELISA）使用說明書?本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中小鼠細(xì)胞色素樣本中小鼠細(xì)胞色素C（CytCCytC）的含量。

2、）的含量。?有效期：有效期：6個(gè)月個(gè)月?保存條件：保存條件：28℃28℃?本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被小鼠細(xì)胞色素C（CytC）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏

3、色的深淺和樣品中的小鼠細(xì)胞色素C（CytC）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計(jì)算樣品濃度。樣本處理及要求樣本處理及要求1.血清血清：全血標(biāo)本請于室溫放置2小時(shí)或4℃過夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于20℃或80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。2.血漿血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于28C1000g離心20分鐘，或?qū)?biāo)本放于20℃或80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。3.組

4、織勻漿組織勻漿：用預(yù)冷的PBS(0.01MpH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000g離心5~10分

5、鐘，取上清檢測。4.細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于20℃或80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。注：標(biāo)本溶血會(huì)影響最后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測。Address:KenhG.Howell748NickelRoadSanFrancisco(415)CA94104Telephone:0014159141567注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)1.嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫

6、育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫2025℃。使用后立即冷藏保存試劑。2.洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。3.消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。4.底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。5.避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。6.在儲存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。7.平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。8.任何反應(yīng)試

7、劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。9.不能使用過期產(chǎn)品。10.如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。試劑準(zhǔn)備試劑準(zhǔn)備試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。20洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20洗滌緩沖液加19份蒸餾水。操作步驟操作步驟1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。2.設(shè)

8、置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15

9、min。7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算以所測標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計(jì)算出樣品的濃度。試劑盒性能試劑盒性能1.檢測范圍：6.25nmolL–200nmolL。2.靈敏度：最低檢測濃度小于1.0nmolL。3.特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。4.重復(fù)性：板