用M-PCR檢測(cè)閩江流域表面水體中病原性大腸桿菌的毒素基因.pdf

1、大腸桿菌(Escherichia coli.)是人和溫血?jiǎng)游锬c內(nèi)普遍存在的細(xì)菌，可分為病原性大腸桿菌和非病原性大腸桿菌。本文在文獻(xiàn)綜述中介紹了大腸桿菌毒素基因檢測(cè)的研究進(jìn)展以及多重PCR(Multiplex PCR)技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用。本研究以閩江流域表體水面中分離出的大腸桿菌為材料，經(jīng)膜過濾法(membrane filtration method)結(jié)合mFC—BCIG培養(yǎng)基的方法來分離糞大腸桿菌，并使用乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基和磷酸鹽葡萄糖胨水培

2、養(yǎng)基來對(duì)其進(jìn)行生化檢測(cè)，最終確定單位體積水樣中糞大腸桿菌的數(shù)量，然后將糞大腸桿菌菌株制成PCR模板同時(shí)甘油保存。 研究結(jié)果表明：對(duì)閩江流域從上游到下游7個(gè)斷面進(jìn)行了大腸桿菌的分離、鑒定和12種毒素基因的多重PCR檢測(cè)。在鑒定的1231株糞大腸桿菌中檢出10種毒素基因，其中具有擴(kuò)散性黏附素(aidA—1)毒素基因的大腸桿菌占總數(shù)的12.99％，熱不穩(wěn)定腸毒素(elt)和熱穩(wěn)定腸毒素(astA)數(shù)量次之(分別占總數(shù)的5.8％和5.4

3、％)，還檢測(cè)出了少數(shù)高危菌株的主要致病因子，例如志賀氏毒素(Stx2e)和耐藥性因子(sepA)等。 分別于不同季節(jié)在閩江流域福州過境段的洪山橋和解放大橋斷面采取水樣，進(jìn)行大腸桿菌的分離、鑒定。用多重PCR方法對(duì)不同季節(jié)分離的大腸桿菌毒素基因的時(shí)空分布進(jìn)行定性與定量分析。從分離的2015株糞大腸桿菌中發(fā)現(xiàn)840株潛在的致病性大腸桿菌，分別屬于腸出血性大腸桿菌(EHEC)、腸聚集性大腸桿菌(EAEC)、腸致病性大腸桿菌(EPEC)

4、和腸產(chǎn)毒性大腸桿菌(ETEC)。檢出的10種毒素基因中，以擴(kuò)散性黏附素基因(aidA—1)、熱穩(wěn)定性腸毒素基因(astA)和耐藥性因子(sepA)為最多；細(xì)菌總量、大腸桿菌總數(shù)和致病性大腸桿菌總數(shù)在冬季較低，春季較多，夏秋季節(jié)達(dá)到全年數(shù)量的高峰；潛在的致病性大腸桿菌的毒素基因的種類和數(shù)量也是在冬季最少，春夏季上升，秋季最多。 使用多重PCR(multiplex PCR)的方法對(duì)糞大腸桿菌菌株中的毒素基因(virulence ge