化學(xué)發(fā)光技術(shù)綜述

1、化學(xué)發(fā)光技術(shù)綜述化學(xué)發(fā)光技術(shù)綜述化學(xué)發(fā)光技術(shù)綜述化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定（CLIA）是將抗原與抗體特異性反應(yīng)與敏感性的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)相結(jié)合而建立的一種免疫檢測(cè)技術(shù)。（一）原理化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定（CLIA）屬于標(biāo)記抗體技術(shù)的一種，它以化學(xué)發(fā)光劑、催化發(fā)光酶或產(chǎn)物間接參與發(fā)光反應(yīng)的物質(zhì)等標(biāo)記抗體或抗原，當(dāng)標(biāo)記抗體或標(biāo)記抗原與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，發(fā)光底物受發(fā)光劑、催化酶或參與產(chǎn)物作用，發(fā)生氧化還原反應(yīng)，反應(yīng)中釋放可見(jiàn)光或者該反應(yīng)激發(fā)熒光物質(zhì)發(fā)光，最后用

2、發(fā)光光度計(jì)進(jìn)行檢測(cè)。（二）特點(diǎn)特異性高、敏感性高、分離簡(jiǎn)便、快速、試劑無(wú)毒、安全穩(wěn)定、可自動(dòng)化。（三）分類1、從反應(yīng)原理上，化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)主要分為直接化學(xué)發(fā)光和酶促反應(yīng)化學(xué)發(fā)光。1.1直接化學(xué)發(fā)光化學(xué)發(fā)光劑在發(fā)光免疫分析過(guò)程中不需酶的催化作用，直接參與發(fā)光反應(yīng)，它們?cè)诨瘜W(xué)結(jié)構(gòu)上有產(chǎn)生發(fā)光的特有基團(tuán)，可直接標(biāo)記抗原或抗體。直接化學(xué)發(fā)光速度快、試劑穩(wěn)定性好，但靈敏度略低于酶促發(fā)光。代表性的發(fā)光劑有吖啶酯、三聯(lián)吡啶釕。1.1.1吖啶酯在堿性

3、條件下被H2O2氧化時(shí)發(fā)出波界影響，其代表性的發(fā)光物質(zhì)有魯米諾及其衍生物、AMPPD1.2.1.魯米諾及其衍生物（HRP激活酶為辣根過(guò)氧化物酶（HRP，魯米諾體系的發(fā)光基本上為閃光型且信號(hào)弱。但在使用增強(qiáng)劑的情況下，發(fā)光的持續(xù)時(shí)間可延到3060min，發(fā)光強(qiáng)度至少增加100倍以上?，F(xiàn)通常采用的體系是LuminolH2O2HRP體系，即用HRP標(biāo)記抗原或抗體，以魯米諾或異魯米諾及其衍生物作發(fā)光底物，對(duì)碘苯酚或?qū)Ρ交拥茸髟鰪?qiáng)劑，用NaOH

4、H2O2作發(fā)光啟動(dòng)試劑，化學(xué)發(fā)光反應(yīng)2min后，光反射強(qiáng)度達(dá)到最高峰；20min后，光強(qiáng)度減少20。1.2.2.異魯米諾（ABEI）新產(chǎn)業(yè)的化學(xué)發(fā)光使用的發(fā)光劑，使用的是閃光非酶激活技術(shù)，加入啟動(dòng)液后測(cè)試0.13s時(shí)間內(nèi)的發(fā)光強(qiáng)度。1.2.3AMPPDAP激活酶為堿性磷酸酶（AP）AMPPD的特性1在堿性環(huán)境下，AMPPD的非酶解性的水解程度低，即本底低；2熱穩(wěn)定性好，在pH7.0的水中，30℃時(shí)的分解半衰期為142h；3發(fā)光為輝光型，