文獻(xiàn)檢索作業(yè)實(shí)例

1、耐熱鏈霉菌生產(chǎn)耐熱鏈霉菌生產(chǎn)AIV的材料選擇與改良的材料選擇與改良天津大學(xué)天津大學(xué)生物工程生物工程2班摘要：乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素（AIV）是利用具有的酰化功能的基因所表達(dá)的胞內(nèi)酶acyA和acyBIB2，對(duì)泰樂(lè)菌素經(jīng)過(guò)乙?；彤愇祯；揎椂?。上世紀(jì)70年代末，Okamoto等發(fā)現(xiàn)耐熱鏈霉菌(Streptomycesthermotolerans)能對(duì)泰樂(lè)菌素的3’0H和4’OH位置進(jìn)行選擇性地?；揎椂D(zhuǎn)化為乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素。利用耐熱鏈

2、霉菌對(duì)泰樂(lè)菌素進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化，發(fā)酵生產(chǎn)乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素是目前工業(yè)化生產(chǎn)最主要的方式。利用耐熱鏈霉菌的乙?；彤愇祯；δ?，在其發(fā)酵液正加入Tylosin后，霉菌將其乙酰化和異戊?；罱K轉(zhuǎn)化為AIV。固定化的鏈霉菌比游離態(tài)更具生產(chǎn)優(yōu)勢(shì)，有效的固定鏈霉菌能使泰樂(lè)菌素的產(chǎn)量得到顯著提高。關(guān)鍵詞：關(guān)鍵詞：耐熱鏈霉菌泰樂(lè)菌素固定化AIVChoosesofHeatresistantStreptomycesimmobilizedmaterialAb

3、stractAbstract：TheAIVisanewAntibioticsinthemarket.WecanuseStreptomycesthermotoleranstoproducetheAIV.ButtheproblemishowtochooseaappropriatematerialtoimmobilizedtheStreptomycesthermotolerans.Theonewhichhavebeenimmobilizedh

4、aveadvantagesovertheonefreeinthesolution.FirstlywewillintroducetheAIVtheroleitplaysinourlife.Secondlywewillintroducesomeresultofthepredecessshaveadiscussion.FinallywewilldiscussanewmethodtochangetheproductivityoftheStrep

5、tomycesthermotolerans.Keywd:Keywd:StreptomycesthermotoleranstylosinimmobilizedAIV1.1.泰樂(lè)菌素的特性泰樂(lè)菌素的特性1.11.1簡(jiǎn)介簡(jiǎn)介泰樂(lè)菌素屬于大內(nèi)酯環(huán)類(lèi)抗生素是放線菌科新霉素鏈霉菌的發(fā)酵產(chǎn)物。其酒石酸鹽和磷酸鹽易溶于水。耐熱鏈霉菌是一種具有非常重要工業(yè)價(jià)值的鏈霉菌，可通過(guò)生物轉(zhuǎn)化法生產(chǎn)乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素(acetylisovaleryltylosin

6、，AIV)。AIV是一種高效的大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素，通過(guò)對(duì)tylosin的3OH乙酰化和4〞OH異戊酰化而獲得。研究表明，AIV對(duì)70S核糖體有強(qiáng)親和力，細(xì)胞膜滲透性好，故抗菌和抗支原體活力均高于泰樂(lè)菌素，且其對(duì)其它抗生素(包括泰樂(lè)菌素)有耐藥性的支原體有效(Okamotoetal.1980Okabeetal.1993)，有著很高的工業(yè)應(yīng)用價(jià)值。1.21.2特性特性泰樂(lè)菌素對(duì)大白鼠及鼠類(lèi)毒性甚小內(nèi)服半數(shù)致死量為5000毫克公斤靜脈注射半數(shù)致

7、死量為475至550毫克公斤皮下注射—1000~250。毫克公斤腹腔注射——600~2000毫克公斤。給鼠飼喂含有5%泰樂(lè)菌素的日糧犬按10毫克公斤的劑量飼喂每日一次為期兩年被試動(dòng)物的血象、尿的理化性質(zhì)及內(nèi)臟形態(tài)學(xué)變化未見(jiàn)異常(H.M.Wth1971)。在美國(guó)人食用以高于FDA標(biāo)準(zhǔn)200倍以上的泰樂(lè)菌素混合飼料喂成的產(chǎn)品仍相當(dāng)安全。泰樂(lè)菌素具有廣譜抗菌活性不但能抑菌而且還可殺菌對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌作用最顯著對(duì)大腸弧菌和巴氏桿菌及有殺滅作用對(duì)真

8、菌和某些螺旋體最敏養(yǎng)液與明膠混合，制成菌膠液，將菌膠液與海藻酸鈉混合后進(jìn)行乳化，然后噴灑氯化鈣溶液進(jìn)行成囊反應(yīng)，再?lài)娙霘ぞ厶沁M(jìn)一步固化，氯化鈣溶液洗滌后李欣收集膠囊。此發(fā)明可以同時(shí)對(duì)三種益生菌進(jìn)行微膠囊化，而且制得的益生菌具有很強(qiáng)的抗逆性，可以更快地在腸道內(nèi)定植生長(zhǎng)。（張文龍2010）綜上幾種方法，可以看出，針對(duì)耐熱鏈霉菌的特點(diǎn)，必須采取具有代表性的吸附表面，由于其需養(yǎng)性高，吸附表面必須具備多孔結(jié)構(gòu)，由于其鏈狀并具有氣生孢子，所以吸附表

9、面必須具有多纖維結(jié)構(gòu)。經(jīng)過(guò)文獻(xiàn)搜集，我們還可采用以下幾種方法：1）、小麥：煮沸處理15min，滅菌；載體100g（干重，濕重140g）：60g菌體（釀酒酵母菌AXAZ1）在1L容器中加入800ml培養(yǎng)基培養(yǎng)直至培養(yǎng)液濃度達(dá)到00.5BE?！?】2）、植物纖維生物反應(yīng)床：甘蔗渣（110mm）裝入玻璃柱內(nèi)，滅菌后丙酸桿菌菌體與發(fā)酵液一起循環(huán)48h后吸附結(jié)束。【5】3）、絲瓜海綿在含有絲瓜海綿（2%wv）的發(fā)酵液中加入吸水鏈霉菌種子培養(yǎng)物沒(méi)過(guò)

10、載體，開(kāi)始發(fā)酵后吸附固定化開(kāi)始【6】4）、多孔硅藻珠多孔硅藻珠（100500um）【7】根據(jù)不同載體特性做相應(yīng)處理，以求達(dá)到可控、最適菌體吸附量。并考慮一下指標(biāo)：1）孔徑：根據(jù)傳質(zhì)和孢子的直徑大小確定孔徑。2）機(jī)械強(qiáng)度：滿(mǎn)足搖瓶發(fā)酵或連續(xù)發(fā)酵的強(qiáng)度。3）表面特性：可根據(jù)菌體表面和材料特性做適當(dāng)?shù)母男浴?）形狀大小：根據(jù)連續(xù)發(fā)酵罐直徑確定。5）滅菌：耐受高壓滅菌鍋中121℃滅菌20min。檢測(cè)指標(biāo)：孔徑分布：掃描電子顯微鏡進(jìn)行泡沫分布和孔

11、徑觀察固定量：質(zhì)差法3.3.提高耐熱鏈霉菌轉(zhuǎn)化泰樂(lè)菌素能提高耐熱鏈霉菌轉(zhuǎn)化泰樂(lè)菌素能力的分子改造與育種力的分子改造與育種作為一種新型抗生素，泰樂(lè)菌素在市場(chǎng)上的地位無(wú)可取代，但是，如何改良細(xì)菌和生產(chǎn)方法一直以來(lái)都是擺在人們面前的難題。為了解決這個(gè)問(wèn)題，很多科研人員都在一直努力開(kāi)發(fā)新的方法。2008年，何群香等發(fā)表論文對(duì)基因改造方法作了詳細(xì)介紹：BIB830是將泰樂(lè)菌素轉(zhuǎn)化為乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素（AIV）的耐熱鏈霉（Streptomycest

12、hermotolerans）工業(yè)菌株。以pIJ8600為載體分別構(gòu)建了acyB1B2基因整合型表達(dá)載體pBIB425和帶紅霉素突變啟動(dòng)子ermEp的紅霉素抗性ermE基因整合型表達(dá)載體pBIB304。通過(guò)大腸桿菌（Escherichiacoli）鏈霉菌屬間接合轉(zhuǎn)移分別將pBIB425、pBIB304和pBIB308（耐熱鏈霉菌的nsdA基因中斷載體）導(dǎo)入工業(yè)菌株BIB0830，抗性篩選分別得到接合子BIB425、BIB304和BIB30

13、8。經(jīng)PCR驗(yàn)證均為陽(yáng)性克隆。搖瓶發(fā)酵結(jié)果表明，與出發(fā)菌株BIB0830相比，BIB425和BIB308泰樂(lè)菌素轉(zhuǎn)化率分別提高了14%和22%，而B(niǎo)IB304則無(wú)明顯影響。目前對(duì)于耐熱鏈霉菌的分子育種研究少有報(bào)道，而且研究也主要集中在負(fù)責(zé)酰基化功能的3個(gè)基因acyA和acyB1B2上。其中acyA主要負(fù)責(zé)乙酰基化功能(Arisawaetal.19931995)，而acyB1B2負(fù)責(zé)異戊?；δ埽琣cyB2基因是acyB1基因的正調(diào)控基