math5對大鼠視網(wǎng)膜m252;ller細(xì)胞源性干細(xì)胞向神經(jīng)節(jié)細(xì)胞轉(zhuǎn)化的調(diào)控作用

1、中圖分類號U D CR 7 76 1 0八年制學(xué)位論文學(xué)校代碼! Q §三3密級 公玨M a t h 5 對大鼠視網(wǎng)膜M t i l l e r 細(xì)胞源性干細(xì)胞向神經(jīng)節(jié)細(xì)胞轉(zhuǎn)化的調(diào)控作用R e g u l a t i o no f M a t h 5 o n r e t i n a lM f i l l e r ．- d e r i v e ds t e mc e l l sd i f f e r e n t i a t i

2、n gi n t or e t i n a lg a n g l i o n c e l l s作者姓名：學(xué)科專業(yè)：研究方向：學(xué)院( 系、所) ：指導(dǎo)教師：張雪詠臨床醫(yī)學(xué)眼科學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院夏曉波教授論文答辯日期趁＆：監(jiān)：芭 答辯委員會主席中 南 大 學(xué)2 0 1 3 年5 月摘要第一章 大鼠視網(wǎng)膜M t i l l e r 細(xì)胞的原代培養(yǎng)及純化目的：對大鼠視網(wǎng)膜M O i l e r 細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)并改良其純化方法，以得到高純度的M t

3、 i l l e r 細(xì)胞。方法：取出生1 0 ．2 1 天S D 大鼠，顯微鏡下分離視網(wǎng)膜，經(jīng)胰酶消化后置于含1 0 ％F B S 的D M E M 培養(yǎng)基中培養(yǎng)，6 ．8 天后換液，將視網(wǎng)膜細(xì)胞分為A 、B 兩組，A 組行完全胰酶消化法傳代培養(yǎng)，B 組行反復(fù)不完全胰酶消化法傳代培養(yǎng)。觀察兩組細(xì)胞的生長情況，培養(yǎng)一個月后行免疫熒光組織化學(xué)檢測、熒光激活流式細(xì)胞分選儀( F A C S )及R T ．P C R 對兩組細(xì)胞進(jìn)行檢測，比較

4、兩組視網(wǎng)膜M t i l l e r 細(xì)胞的純度。結(jié)果：細(xì)胞培養(yǎng)一個月后，F(xiàn) A C S 分析顯示，A 組獲得視網(wǎng)膜M t i l l e r 細(xì)胞的純度為7 5 ．4 1 ％，而B 組獲得視網(wǎng)膜M t i l l e r 細(xì)胞的純度高達(dá)9 8 ．0 1 ％。R T ．P C R 結(jié)果顯示B 組中視網(wǎng)膜M t i l l e r 細(xì)胞的表達(dá)物( G S 、V i m e n t i n 、C l u s t e r i n 、C a r

5、 b o n i ca n h y d r a s e ) 高于A 組；而視網(wǎng)膜其他細(xì)胞的標(biāo)志物B 組無表達(dá)，A 組少量表達(dá)。熒光顯微鏡1 0 倍下各組分別選取l O 個非重疊視野，計算表達(dá)G S 的細(xì)胞陽性率。A組G S 陽性表達(dá)率為8 3 ．2 0 ％4 - 5 ．1 6 ％，B 組G S 的陽性表達(dá)率為9 8 ．5 0 ％4 - 1 ．0 8 ％，采用兩樣本近似t 檢驗統(tǒng)計學(xué)分析，t 一9 ．1 7 8 ，P < 0 ．0