共振瑞利散射法測定蛋白質(zhì).pdf

1、蛋白質(zhì)的定量測定是生物化學(xué)和其它生物學(xué)科中經(jīng)常涉及的分析任務(wù)，是臨床檢驗(yàn)中診斷疾病及檢查治療效果的重要指標(biāo)，也是許多生化藥物分離提純中質(zhì)量檢驗(yàn)及食品檢驗(yàn)中常見的分析項(xiàng)目。蛋白質(zhì)和核酸是生命現(xiàn)象的物質(zhì)基礎(chǔ)。蛋白質(zhì)擔(dān)負(fù)著各種生理功能，從整體上維持生物體新陳代謝活動的進(jìn)行，是生物性狀的直接表達(dá)者。它是人體內(nèi)的營養(yǎng)物質(zhì)，參與體內(nèi)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)作用，絕大多數(shù)的酶屬于蛋白質(zhì)，大部分的激素也是由蛋白質(zhì)構(gòu)成，蛋白質(zhì)是人體的免疫物質(zhì)，也是細(xì)胞自我復(fù)制過程中不

2、可替代的物質(zhì)，它與病毒、物質(zhì)的逆轉(zhuǎn)、遺傳、生命的起源和生物進(jìn)化有密切的聯(lián)系。定量分析蛋白質(zhì)也是許多生化藥物的分離提純和質(zhì)量檢驗(yàn)中最常用的手段，如酶、多肽、激素、蛋白質(zhì)的分離、純化等。對于蛋白質(zhì)的測定，目前研究最多、應(yīng)用最廣、操作較為簡便的分子光譜分析法主要有吸光光度法、熒光分析法和共振瑞利散射法，共振瑞利散射法是近幾年才發(fā)展起來的新技術(shù)，突出特點(diǎn)是靈敏度高、簡便實(shí)用，在蛋白質(zhì)及核酸等生物大分子的分析測定中優(yōu)勢明顯，前景廣闊。 本

3、論文從探索蛋白質(zhì)新共振瑞利探針、研究其相互作用機(jī)理出發(fā)，以共振瑞利散射法為主要研究手段進(jìn)行了各種蛋白質(zhì)的研究。 論文的第一章綜述了共振瑞利散射技術(shù)的原理和分析應(yīng)用，以及在蛋白質(zhì)測定方面的研究進(jìn)展。 論文的第二章至第五章采用共振瑞利散射法，建立了測定蛋白質(zhì)的新體系，并對實(shí)際樣品中的總蛋白質(zhì)含量進(jìn)行了測定，主要內(nèi)容如下： 1.茜素綠—蛋白質(zhì)體系的共振瑞利散射光譜及其分析應(yīng)用 基于蛋白質(zhì)對茜素綠共振瑞利散射的增

4、強(qiáng)作用，建立了一種測定水溶性蛋白質(zhì)的新方法。在酸性BR緩沖溶液中，茜素綠在365nm處的共振瑞利散射增強(qiáng)與蛋白質(zhì)濃度呈線性關(guān)系。對人血清白蛋白、牛血清白蛋白、γ-人球蛋白、卵白蛋白測定的檢出限均低于14ょg/L。該方法快速、簡便、靈敏、穩(wěn)定、選擇性好，用于人血清、尿液中總蛋白質(zhì)含量的測定，結(jié)果滿意。 2.溴百里酚藍(lán)—蛋白質(zhì)體系的共振瑞利散射光譜及蛋白質(zhì)的測定 基于蛋白質(zhì)對溴百里酚藍(lán)共振瑞利散射的增強(qiáng)作用，建立了一種測定蛋

5、白質(zhì)的新方法。在酸性BR緩沖溶液中，溴百里酚藍(lán)在365nm處的共振瑞利散射增強(qiáng)與蛋白質(zhì)濃度呈線性關(guān)系。對人血清白蛋白、牛血清白蛋白、γ-人球蛋白、卵白蛋白測定的線性范圍分別為0.04～2.4、0.04～2.4、0.04～1.6、0.04～1.8mg/L；相應(yīng)的檢出限分別為23.9、23.0、25.0、30.4よg/L。該方法快速、簡便、靈敏、穩(wěn)定，用于人血清、尿液中總蛋白質(zhì)含量的測定，結(jié)果滿意。 3.靛藍(lán)胭脂紅共振瑞利散射法測定

6、蛋白質(zhì) 在pH2.34的BR緩沖溶液中，靛藍(lán)胭脂紅及蛋白質(zhì)的共振瑞利散射(RRS)均十分微弱。兩者結(jié)合形成復(fù)合物能使RRS信號急劇增強(qiáng)，最大散射波長為393nm。人血清白蛋白、牛血清白蛋白、γ-人球蛋白、卵白蛋白的線性范圍分別為0.1～3.7、0.08～3.0、0.05～2.0、0.1～2.4mg/L；相應(yīng)的檢出限分別為24.6、20.7、20.4、25.7よg/L。用于人血清、牛奶、豆?jié){、尿液中總蛋白質(zhì)的測定，結(jié)果與經(jīng)典的考馬

7、斯亮藍(lán)G-250法一致。 4.甲基藍(lán)體系共振瑞利散射法測定蛋白質(zhì) 在pH2.36的BR緩沖溶液中，甲基藍(lán)與蛋白質(zhì)相互作用生成復(fù)合物，使最大波長350nm的共振瑞利散射光譜得到增強(qiáng)，增強(qiáng)程度與蛋白質(zhì)濃度成正比。據(jù)此建立了測定蛋白質(zhì)的新方法。人血清白蛋白、牛血清白蛋白的線性范圍分別為0～2.4mg/L、0～2.8mg/L，相應(yīng)檢出限分別為39.3、43.4よg/L。方法的穩(wěn)定性好，靈敏度高，用于人血清、尿液中總蛋白質(zhì)的測定，