增強化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫分析新體系的研究及應(yīng)用.pdf

1、本論文的工作主要是研究了兩種酚類化合物4-(1，2,4-三氮唑-1-基)苯酚(TRP)和4-羥基-4-碘-聯(lián)苯(HIOP)對Luminol-H2O2-HRP化學(xué)發(fā)光體系的增強作用以及探討建立的新型增強化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫分析體系的應(yīng)用。本文的具體工作如下： (1)建立了以TRP為增強劑的Luminol-H2O2-HRP-TRP增強化學(xué)發(fā)光新體系，優(yōu)化了體系的各項影響因素如反應(yīng)物(魯米諾、增強劑、H2O2)的濃度、表面活性劑、緩沖溶液

2、。在選定條件下，化學(xué)發(fā)光強度值與HRP的濃度在2.0x10-9～4×10-8g/mL內(nèi)呈良好線性關(guān)系，檢測限為5.0×10-10g/mL。與經(jīng)典的增強劑對碘苯酚相比，TRP增強化學(xué)發(fā)光效果較好，可應(yīng)用于過氧化氫傳感器的研究。 (2)以HIOP為增強劑建立Luminol-H2O2-HRP-HIOP增強化學(xué)發(fā)光新體系，對體系的各項影響因素如測定時間、反應(yīng)物(魯米諾、增強劑、H2O2)的濃度、增強劑的溶劑進行了優(yōu)化。在選定條件下，測定

3、了HRP的工作曲線及檢測限，分別為5.0x10-11～4×10-8g/mL和9.0x10-12g/mL。與經(jīng)典的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫體系Iuminol-H2O2-HRP-IOP對HRP的測定相比，檢測限低兩個數(shù)量級，并且線性范圍也拓寬了一個數(shù)量級。以上證明新體系可以應(yīng)用于化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫分析中，用于腫瘤標志物的檢測。對新體系的發(fā)光機理進行了初步探討。 (3)高靈敏度的Luminol-H2O2-HRP-HIOP化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫分析新體

4、系和具有高效分離特點的磁性微球相結(jié)合，建立一種快速、靈敏、的化學(xué)發(fā)光免疫檢測方法，應(yīng)用于對甲胎蛋白抗原的檢測。新方法測定甲胎蛋白抗原濃度的線性范圍為1.0～150ng/mL，相關(guān)系數(shù)0.9993，檢測限為0.5ng/mL。與常用的ELISA法相比，靈敏度提高了10倍。通過對人體血清樣品的分析，得出結(jié)果具有良好的相關(guān)性。 (4)將上述新免疫檢測新方法應(yīng)用于對癌胚抗原(CEA)的檢測。該方法測定CEA抗原濃度的線性范圍為0.5～40