TBCB在小鼠肝臟缺血再灌注損傷中表達的研究.pdf

1、目的：
　　本實驗通過建立小鼠肝臟全肝阻斷缺血再灌注損傷（IRI）模型，檢測微管蛋白折疊輔助因子B（TBCB）在小鼠肝臟缺血再灌注后不同時間點的表達，探討TBCB在小鼠全肝缺血再灌注損傷中的作用及其關(guān)系。
　　方法：
　　1、采用小鼠全肝阻斷缺血再灌注損傷模型，我們選取的健康C57小鼠60只被隨機分為對照組7只、缺血再灌注組42只；缺血再灌注組，每組通過夾閉小鼠肝門，缺血30分鐘，再按不同灌注時限（2、4、6、8、12

2、、24h）分為6個亞組，每個亞組7只，構(gòu)建小鼠全肝阻斷缺血再灌注損傷模型；分別于實驗結(jié)束后留取小鼠血液及肝臟組織。
　　2、首先選用全自動生化分析儀檢測血清中ALT、AST水平，了解肝功能的表達情況，用ELISA檢測血清中IL-6、TNF-α表達水平。
　　3、應(yīng)用HE染色觀察肝臟的形態(tài)學(xué)改變。以及采用Western Blot和免疫組織化學(xué)的方法，檢測缺血再灌注各個時間點肝組織中TBCB蛋白、IL-6、TNF-α的表達變化。

3、
　　4、Real-Time PCR檢測對照組及缺血再灌注組，各個時間點小鼠肝臟組織TBCB因子的mRNA表達和變化。
　　結(jié)果：
　　1、全自動生化分析儀檢測血清中ALT、AST樣本中，以及ELISA檢測血清中IL-6、TNF-α表達水平，與對照組比較，缺血再灌注組中的AST、ALT、IL-6、TNF-α表達水平明顯高于對照組，且在再灌注的各個時間點中，12 h最高；與對照組比較，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

4、r>　　2、HE染色觀察肝臟的形態(tài)學(xué)改變上，在我們發(fā)現(xiàn)缺血再灌注組與對照組比較，肝臟形態(tài)學(xué)明顯改變，尤其在缺血再灌注后12 h，肝細胞變性、壞死明顯，肝索結(jié)構(gòu)消失，部分肝細胞灶狀壞死。
　　3、IHC檢測對照組及缺血再灌注組的TBCB、IL-6、TNF-α蛋白的表達水平情況，結(jié)果顯示：缺血再灌注組TBCB、IL-6、TNF-α蛋白表達水平明顯高于對應(yīng)的對照組，且缺血再灌注組各個時間點的表達存在差異性， TBCB、IL-6、TNF-

5、α蛋白的表達在12 h達到高峰。
　　4、Real-Time PCR和Western Blot檢測結(jié)果顯示：TBCB基因及TBCB蛋白表達水平明顯高于對應(yīng)的對照組，并且在缺血再灌注組各個時間點中，12h變化最明顯。
　　5、相關(guān)性分析結(jié)果顯示：在小鼠肝臟缺血再灌注中TBCB蛋白水平的表達與TNF-α，IL-6蛋白水平與呈一定的關(guān)聯(lián)性（P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1、通過實驗可以看出，在基因水平和蛋白水平，在