極大節(jié)旋藻實(shí)時(shí)熒光定量PCR內(nèi)參基因的選擇.pdf

1、用實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)基因表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，需要內(nèi)參基因?qū)?duì)結(jié)果數(shù)據(jù)進(jìn)行校正。內(nèi)參基因必須是在所研究的實(shí)驗(yàn)條件下具有相似的表達(dá)水平的基因。因此選擇合適的內(nèi)參基因是通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)目的基因進(jìn)行準(zhǔn)確定量的重要的前提條件。本實(shí)驗(yàn)中，我們利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)極大節(jié)旋藻中16SrRNA、TEF(翻譯延伸因子，GTPases)、RPL13(核糖體蛋白)、PSR(藻藍(lán)蛋白β亞基)、CYP(親環(huán)素家族一員)、GAPDH(甘油醛-3-磷酸脫

2、氫酶)、Hsp(熱休克蛋白)和rpoD(RNA聚合酶σ70因子)八個(gè)候選基因在正常生長(zhǎng)(設(shè)為對(duì)照組)、低溫、低光強(qiáng)、氮磷缺乏及低pH五個(gè)環(huán)境條件處理下的穩(wěn)定性進(jìn)行檢測(cè)，得到基因在樣品中的表達(dá)水平Cq值。然后用Bestkeeper、Normfinder。和geNorm三個(gè)內(nèi)參基因篩選軟件對(duì)每個(gè)基因在樣品中的Cq值進(jìn)行分析，得到不同基因在樣品中的表達(dá)差異，并且從中選出表達(dá)最穩(wěn)定的基因作為合適的內(nèi)參基因。雖然基于不同的算法，但是三個(gè)篩選軟件的