銅綠假單胞菌與輕型鏈球菌混合生物膜體外模型建立.pdf

1、目的：
　　探索混合細(xì)菌生物膜(biofilm,BF)培養(yǎng)的適宜條件，建立混合細(xì)菌BF體外模型，并為研究混合細(xì)菌BF的調(diào)控機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
　　方法：
　　分別培養(yǎng)銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)菌株P(guān)AO1、輕型鏈球菌(Streptococcus mitis)標(biāo)準(zhǔn)株 ATCC49456。紫外分光光度計、CCK-8（cell counting kit-8）比色法比較兩種細(xì)菌在不同pH值、培養(yǎng)基、

2、混合比例、加入順序和混合時間條件下的生長情況。建立單獨及混合細(xì)菌BF后，熒光探針SYTO9/PI標(biāo)記，激光共聚焦顯微鏡（Confocal Laser Scanning Microscopy，CLSM）觀察BF內(nèi)部活死菌比例。掃描電鏡（Scanning Electron Microscopy,SEM）觀察BF結(jié)構(gòu)。
　　結(jié)果：
　　pH值為7.5最適宜兩種細(xì)菌生長，P<0.01；兩種細(xì)菌在腦心浸出液培養(yǎng)基中生長明顯優(yōu)于胰大豆蛋

3、白胨肉湯培養(yǎng)基，P<0.01；PAO1與S.mitis以1：3混合，且PAO1優(yōu)先加入，能形成較好的BF，P<0.01；兩種細(xì)菌混合的時機(jī)以PAO1培養(yǎng)后立即混合S.mitis為優(yōu)，P<0.01。CLSM結(jié)果顯示 PAO1可形成成熟致密的BF；S.mitis單獨培養(yǎng)不形成BF。PAO1組與混合培養(yǎng)組 BF厚度分別為(19.02±1.298)μm和(28.76±3.472)μm，P<0.05。SEM顯示混合細(xì)菌BF內(nèi)兩種細(xì)菌共存，結(jié)構(gòu)更加