YAP基因沉默對(duì)人前列腺癌細(xì)胞增殖、凋亡及其雄激素受體的影響.pdf

1、1目的：探討慢病毒介導(dǎo)shRNA沉默Yes-相關(guān)蛋白(Yes-associated protein, YAP)基因?qū)θ饲傲邢侔┘?xì)胞株LNCaP細(xì)胞增殖、凋亡及其雄激素受體(androgen receptor, AR)的影響。
　　方法：3條針對(duì)YAP基因的shRNA（YAP-shRNA1、YAP-shRNA2、YAP-s hR NA3）慢病毒干擾載體感染LNC aP細(xì)胞，嘌呤霉素篩選7天以上，建立慢病毒穩(wěn)定感染細(xì)胞系；利用實(shí)時(shí)熒光

2、定量PCR和Wes tern blot技術(shù)分別檢測(cè)細(xì)胞YAP、AR mRNA和蛋白表達(dá)；選取沉默效率最高 YAP-shRNA1慢病毒干擾載體組；以細(xì)胞增殖/毒性檢測(cè)(cell counting kit-8, CCK-8)、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)(colony formation)測(cè)定LNC aP細(xì)胞增殖能力；Ho ec hs t33258染色法對(duì)細(xì)胞凋亡形態(tài)改變進(jìn)行檢測(cè)；流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry, FCM)檢測(cè)細(xì)胞周期分布和凋

3、亡改變， Western blot技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期調(diào)控因子p21、CyclinD1和凋亡調(diào)控因子Bc l-2、Bax表達(dá)。
　　結(jié)果：重組慢病毒成功感染前列腺癌LNC aP細(xì)胞，通過(guò)嘌呤霉素篩選7天后，感染效率達(dá)95％以上，獲得穩(wěn)定沉默 YAP基因 LNC aP細(xì)胞系。與空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組比較，感染s hR NA慢病毒干擾載體各組中 YAP、AR mRNA及蛋白表達(dá)水平顯著下調(diào)，細(xì)胞增殖受到明顯抑制，細(xì)胞周期阻滯于G1期，細(xì)胞