缺血缺氧致PVL新生大鼠Cx47表達(dá)及其對(duì)少突膠質(zhì)細(xì)胞髓鞘化的影響.pdf

1、目的：
　　研究縫隙連接通道蛋白47(Connexin Cx47)在新生大鼠缺氧缺血性(HI)腦室周?chē)踪|(zhì)軟化(PVL)發(fā)生、發(fā)展中表達(dá)變化，并闡明Cx47對(duì)少突膠質(zhì)細(xì)胞(Oligodendrocyte OL)髓鞘化的影響，試圖為HI性腦損傷的防治奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：
　　將120只3日齡新生大鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組60只和對(duì)照組60只。實(shí)驗(yàn)組建立PVL動(dòng)物模型，結(jié)扎3日齡新生大鼠右側(cè)頸總動(dòng)脈后低氧2h（8％氧氣和92

2、％氮?dú)獾幕旌蠚怏w）;對(duì)照組不結(jié)扎僅分離右側(cè)頸總動(dòng)脈，也不低氧。在手術(shù)后1、3、7、14天分別留取腦組織標(biāo)本，采用HE染色、透射電鏡觀察腦組織形態(tài)學(xué)改變，免疫組織化學(xué)、Western blot和Real-Time PCR等分子生物學(xué)技術(shù)，檢測(cè)腦組織缺血缺氧后Cx47蛋白和基因表達(dá)的改變。
　　結(jié)果：
　　光鏡下可見(jiàn)對(duì)照組腦組織結(jié)構(gòu)致密，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)完整，排列均勻，胞核大，染色清晰。HI組1d時(shí)腦白質(zhì)區(qū)有明顯的細(xì)胞間隙增寬，

3、開(kāi)始出現(xiàn)細(xì)胞腫脹、變形、細(xì)胞核固縮等;3d時(shí)即可見(jiàn)側(cè)腦室旁白質(zhì)細(xì)胞大量的壞死，神經(jīng)纖維走行紊亂，腦組織結(jié)構(gòu)疏松模糊呈囊性及篩網(wǎng)狀壞死，7d腦室旁白質(zhì)雖壞死區(qū)域更為廣泛，但其程度有所減輕呈簇狀及點(diǎn)狀壞死，水腫減輕出現(xiàn)不同程度膠質(zhì)增生。14d腦白質(zhì)胼胝體變薄，纖維走向紊亂，部分出現(xiàn)囊腔病變側(cè)腦室進(jìn)行性擴(kuò)大。透射電鏡下對(duì)照組呈現(xiàn)完整的細(xì)胞形態(tài)，且細(xì)胞間通過(guò)縫隙連接通道廣泛連接;而HI組可見(jiàn)溶解碎裂的少突膠質(zhì)細(xì)胞間斷續(xù)的縫隙連接。免疫組化可見(jiàn)C

4、x47與MBP的表達(dá)，Cx47與MBP在蛋白和基因水平上均表現(xiàn)為隨著日齡的增加表達(dá)增加，與對(duì)照組比較，HI組各時(shí)間點(diǎn)Cx47的表達(dá)均相對(duì)降低，以3d、7d天最為明顯，且與MBP表達(dá)趨勢(shì)幾乎一致。
　　結(jié)論：
　　在HI致PVL中，Cx47的表達(dá)雖呈上升趨勢(shì)，但在3d和7d較對(duì)照組表達(dá)顯著降低，此階段為腦組織少突膠質(zhì)細(xì)胞損傷及髓鞘化障礙發(fā)生關(guān)鍵時(shí)間，所以我們認(rèn)為，在缺血缺氧后Cx47蛋白表達(dá)量的降低可能是影響少突膠質(zhì)細(xì)胞損傷及