擬南芥紅光突變體蛋白質(zhì)組學初步分析.pdf

1、植物功能基因組學研究在本世紀發(fā)展十分迅速，然而在轉(zhuǎn)錄水平提供的基因表達的信息確還不能完全確定一個基因的功能。因為基因只是遺傳信息的攜帶者，蛋白質(zhì)才是生命功能的真正體現(xiàn)者，且在從基因到蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)錄及翻譯過程中，在不同機體，不同組織，甚至不同階段都有不同<'[1]>。所以廣范圍研究蛋白質(zhì)研究表達和功能模式的蛋白質(zhì)組學已經(jīng)成為功能基因組學的重要領域。它旨在闡明生物體內(nèi)全部蛋白質(zhì)的表達模式及功能模式，其內(nèi)容包括鑒定蛋白質(zhì)的表達、存在方式(修飾方

2、式)、結(jié)構、功能及相互作用等。蛋白質(zhì)組是指一個基因組所編碼的所有蛋白質(zhì)的總和。蛋白質(zhì)組方法學包括蛋白質(zhì)組分離技術和蛋白質(zhì)組鑒定技術。用于蛋白質(zhì)分離的雙向凝膠電泳技術是蛋白質(zhì)組研究的核心，而鑒定技術則是蛋白質(zhì)組技術的支柱。 為了進一步研究植物紅光信號途徑，本文利用雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳技術，分離子紅光受體雙突變體phyAphyB與col-4的蛋白質(zhì)組，得到了高重復性的雙向凝膠圖譜。通過初步的斑點配比，獲得了兩種材料的差異蛋白質(zhì)點圖

3、譜；并選取55個變化明顯的蛋白質(zhì)點用原位酶解，抽提蛋白質(zhì)片段進行MALDI-TOF-TOF-MS質(zhì)譜分析，利用肽質(zhì)量指紋圖數(shù)據(jù)在數(shù)據(jù)庫中進行檢索，其中包括普通反應酶、過氧化物酶、轉(zhuǎn)錄因子、綁定蛋白，分子伴侶蛋白等。同時為了發(fā)現(xiàn)更多植物紅光信號途徑與藍光信號途徑的交叉因子，還以擬南芥野生型(Arabidopsis，Col-4)，紅光受體突變體(phyB)和藍光受體突變體(cry1-304)七天幼苗的全蛋白為材料，在增溶樣品，設定合適的電泳