大腸桿菌Tat蛋白質(zhì)轉運系統(tǒng)轉運效率突變菌株的篩選.pdf

1、Tat蛋白轉運系統(tǒng)是大腸桿菌中重要的蛋白質(zhì)轉運系統(tǒng)，在該系統(tǒng)中蛋白質(zhì)的轉運受到多種因素的影響。本研究的目的是建立研究轉運效率的技術方法，并嘗試通過該方法篩選轉運效率突變株，為進一步的研究提供實驗材料。 研究表明利用細菌素作為報告蛋白，在液體和固體培養(yǎng)中細菌的生長密度可反映Tat轉運系統(tǒng)轉運效率的高低，因而可作為檢測轉運效率突變菌株的手段。 比較了菌株在液態(tài)搖瓶和固體平板培養(yǎng)的生長密度，結果表明液體發(fā)酵培養(yǎng)所測得的生長曲線

2、和固體平板點種培養(yǎng)后生長的菌苔濃密度均能通過殺傷作用反映菌株的轉運效率。為了便于篩選，選用固體平板對誘變后菌株進行初步篩選，進一步利用液體培養(yǎng)加以驗證。 比較RR(twin-Argtranslocation)和KK(twin-Lystranslocation)兩種信號肽對細菌素轉運的能力，發(fā)現(xiàn)RR信號肽對細菌素的高轉運率使對自身細胞有強烈的殺傷作用，造成后續(xù)檢測結果工作的困難，因而選用KK信號肽用于對突變菌株的篩選。 本

3、研究通過離子束作為誘變劑對大腸桿菌MC4100A進行誘變，并導入編碼有Tat信號肽和細菌素基因的質(zhì)粒，作為轉運自殺式探針檢測系統(tǒng)，篩選大腸桿菌Tat轉運系統(tǒng)轉運效率有變化的突變菌株。進一步分析初篩后細胞排列特性，在M9培養(yǎng)基中的生長性能和在SDS中培養(yǎng)特征和屬性鑒定，從而確認Tat蛋白質(zhì)轉運系統(tǒng)轉運效率可能產(chǎn)生變化的菌株。通過以上方法篩選出了10株在阿拉伯糖培養(yǎng)中生長密度有變化的菌株。進一步分析10株菌在M9培養(yǎng)基中和含有2％SDS平板