IBDV-DDK病毒株的全基因組測(cè)定和序列分析.pdf

1、雞傳染性法氏囊?。↖nfectious Bursal Disease, IBD）是由傳染性法氏囊病病毒（Infectious Bursal Disease Virus，IBDV）引起的一種急性、高度接觸性傳染病。自超強(qiáng)毒株（vvIBDV）出現(xiàn)后，致病力顯著加強(qiáng)。vvIBDV不僅能夠突破母源抗體保護(hù)，感染3~6周齡雛雞，還能夠躲避多數(shù)疫苗株產(chǎn)生的抗體保護(hù)。IBDV-MB株為國(guó)外常用的中等偏強(qiáng)毒力疫苗株，其特征性氨基酸位點(diǎn)與vvIBDV保持

2、基本一致，僅有個(gè)別氨基酸突變，因而在臨床上能夠較為有效防控vvIBDV，該疫苗株從九十年代起就有在國(guó)內(nèi)臨床應(yīng)用研究和使用的報(bào)道。本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)IBDV-DDK病毒株的全基因組序列進(jìn)行測(cè)定，并對(duì)其核苷酸序列進(jìn)行同源性分析，明確了該病毒株的遺傳進(jìn)化地位，有助于了解該毒株的變異情況及其與IBDV疫苗株之間的差異，以探求其分子流行特征和變異規(guī)律，為今后控制IBDV的流行和科學(xué)研究提供一定的參考依據(jù)。
　　根據(jù) GenBank公布的IBDV毒

3、株全基因組序列，設(shè)計(jì)出四對(duì)引物用于IBDV-DDK病毒株全基因組序列擴(kuò)增。通過(guò)RT-PCR技術(shù)分段擴(kuò)增出DDK病毒株的核苷酸序列，分別連接到pGEM-T Easy載體上，轉(zhuǎn)化DH5α感受態(tài)細(xì)胞，挑取單克隆菌落，提取質(zhì)粒并進(jìn)行 PCR、酶切和測(cè)序鑒定，然后進(jìn)行核苷酸同源性和遺傳進(jìn)化關(guān)系分析。結(jié)果表明，各個(gè)基因片段的重組質(zhì)粒構(gòu)建成功，核苷酸序列分析表明，IBDV-DDK病毒株A節(jié)段大小為3257 bp，含有兩個(gè)開放閱讀框（ORF），大閱讀框

4、編碼多聚蛋白 VPx，小閱讀框編碼 VP5蛋白；B節(jié)段大小為2823 bp，含有一個(gè)ORF，編碼VP1蛋白。通過(guò)與本研究所選參考毒株核苷酸的同源性比對(duì)分析，DDK病毒株 A節(jié)段與參考毒株的核苷酸同源性范圍在83.4％~98.3%，其中與MB毒株同源性為98.3%，與血清Ⅱ型23/82和OH毒株同源性為83.4%；B節(jié)段核苷酸同源性范圍在88.9%~98.7%，其中與MB毒株同源性為98.7%，與E毒株同源性為88.9%。遺傳進(jìn)化樹分析表

5、明，DDK病毒株A、B節(jié)段均與MB、UK661等毒株親緣關(guān)系相對(duì)較近。將DDK病毒株與強(qiáng)弱毒株氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)分析表明，DDK病毒株VPx中第222位特征性氨基酸是T，而其他vvIBDV的該位點(diǎn)均為A，中等偏強(qiáng)毒力疫苗MB株和2512株的該位點(diǎn)分別為A和P，常見(jiàn)弱毒疫苗株的該位點(diǎn)為P，且該位點(diǎn)對(duì)于IBDV致病性有重要影響，其余特征性氨基酸與vvIBDV基本保持一致；B節(jié)段相對(duì)于A節(jié)段比較保守，IBDV-DDK病毒株的VP1蛋白中第4位