沉積微桿菌TPS-TPP基因的克隆、表達(dá)及酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf

1、海藻糖分子是由兩個葡糖基以α-1,1糖苷鍵連接而成，具有優(yōu)良的生物學(xué)性能和食品加工性能，其被廣泛應(yīng)用于食品工業(yè)等領(lǐng)域。本實驗中，我們對耐壓耐冷沉積微桿菌 Microbacterium sediminis YLB-01的重組6-磷酸海藻糖合成酶（msTPS）和6-磷酸海藻糖磷酸酯酶（msTPP）的性質(zhì)進(jìn)行了一系列的研究。msTPS和 msTPP預(yù)測分子量分別為55.15kDa和28.59kDa，理論等電點分別為5.89和4.59。

2、　　我們首先以 Microbacterium sediminis YLB-01的TPS和 TPP編碼基因為依據(jù)，分別克隆目的基因，構(gòu)建重組質(zhì)粒并將其導(dǎo)入到表達(dá)宿主菌體內(nèi)進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，然后通過 Ni2+親和層析、透析及超濾獲得較純濃縮蛋白收集液，最后通過相關(guān)實驗對其酶學(xué)性質(zhì)做了探究。研究表明：⑴重組msTPS最適反應(yīng)溫度和pH分別為40℃和7.5，4℃時依然具有較高的活性，熱穩(wěn)定性較差，Mg2+、Co2+或 Ba2+能極大的促進(jìn)其活性，M

3、n2+、Zn2+、Ca2+和 Hg2+對活性沒有影響，在本實驗條件下對6-磷酸葡萄糖和尿苷二磷酸葡萄糖的Km值分別為1.38mM和1.53mM，最大反應(yīng)速度 Vmax為62.5 U/min?mg。⑵重組 msTPP酶最適反應(yīng)溫度和pH分別為30℃和7.5，熱穩(wěn)定性也較差，Mg2+存在的條件下活性達(dá)到最高，Co2+或 Ba2+對活性有較大的促進(jìn)作用，Mn2+、Zn2+、Ca2+對重組酶活性沒有影響，在本實驗條件下對6-磷酸海藻糖的Km為2