巨大芽孢桿菌B196菌株產(chǎn)抗菌物質(zhì)的發(fā)酵條件優(yōu)化及分離鑒定研究.pdf

1、本研究優(yōu)化了巨大芽孢桿菌(Bacillus megaterium)B196菌株產(chǎn)生拮抗物質(zhì)的發(fā)酵條件，對該菌產(chǎn)生的拮抗物質(zhì)進(jìn)行分離純化和鑒定，并對其特性和抑菌活性進(jìn)行研究。所獲得的結(jié)果如下：
　　 ⑴通過單因素試驗(yàn)篩選出培養(yǎng)B196菌株高產(chǎn)抗菌物質(zhì)的最佳碳源、氮源和無機(jī)鹽分別為蔗糖、蛋白胨和氯化鈉，通過正交試驗(yàn)獲得B196菌株發(fā)酵的培養(yǎng)基配方為蔗糖10g/L，蛋白胨20g/L，NaCl7g/L，K2HPO45g/L;最佳條件為:

2、溫度27℃，時間5d，接種量1％，pH7.0，裝液量40 mL/200 mL。
　　 ⑵從B196菌株的代謝產(chǎn)物中分離純化獲得的化合物，雙縮脲反應(yīng)表現(xiàn)為陽性，茚三酮反應(yīng)開始表現(xiàn)為陰性，但經(jīng)過水解后表現(xiàn)為陽性;該化合物含有Asx、Glx、Pro、Ser和Tyr等5個氨基酸，它們的摩爾比約為3∶1∶1∶1∶1;該化合物的分子量為1042.5927Da;利用碰撞誘導(dǎo)解離(CID)技術(shù)所獲知其離子碎片與IturinA家族中Iturin

3、A2吻合，故將該化合物鑒定為IturinA2。
　　 ⑶以水稻紋枯病菌為指示菌，測定從B196菌株的代謝產(chǎn)物中分離純化獲得的化合物的穩(wěn)定性。結(jié)果表明，該化合物在90℃處理60 min和121℃高溫高壓處理20 min后抑菌活性分別下降了40.45％和60.45％;該化合物經(jīng)不同的pH處理24 h，在pH2-10時抑菌活性沒有發(fā)生變化，但在pH為12時活性下降;該化合物對胃蛋白酶、蛋白酶K、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶不敏感。采用菌絲生長

4、速率法，測定了化合物對7種植物病原真菌的活性，結(jié)果表明，其對7種供試植物病原真菌均有活性，其中對水稻稻瘟病菌（Pyricularia grisea）的活性最強(qiáng);采用抑菌圈法測定化合物對植物病原細(xì)菌的活性，發(fā)現(xiàn)其對水稻細(xì)菌性條斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola)、水稻白葉枯病菌（X.oryzae pv.Oryzae）和番茄青枯病菌（Ralstonia solanacearum）等5種植物病原細(xì)菌有抑菌活

5、性，但是對大豆細(xì)菌性斑點(diǎn)病菌（Pseudomonas syringae pv.Glycinea）、番茄細(xì)菌性斑點(diǎn)病菌（P.syringae pv. Tomato）和魔芋軟腐病菌(Pectobacterium carotovora subsp.crotovora)無抑菌活性。
　　 ⑷B196菌株產(chǎn)生的純拮抗物質(zhì)濃度為40μg/mL、80μg/mL、160μg/mL時，對水稻紋枯病的防效分別為84.01％、97.47％、100％。