花生肽的酶法制備、分離純化及其抗氧化活性研究.pdf

1、我國花生資源非常豐富，花生蛋白質(zhì)具有較高的營養(yǎng)價值，含有人體必須的八種氨基酸。目前，結(jié)合低溫冷榨花生餅粕加工，花生脫脂蛋白資源開發(fā)功能肽成為研究熱點，本文通過蛋白酶在溫和的條件下水解花生蛋白而獲得的花生抗氧化肽。
　　 本文利用花生脫脂蛋白為原料，采用胰蛋白酶、風(fēng)味酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和堿性蛋白酶水解，進行花生分離蛋白的酶解試驗，與溫度、反應(yīng)時間、酶與底物質(zhì)量比(酶底比)、底物濃度(w/v)、pH等因素均對酶解液水解度(DH

2、)和多肽得率(TCA-NSI)產(chǎn)生影響。在此基礎(chǔ)上，篩選出堿性蛋白酶和風(fēng)味酶為工具酶。為優(yōu)化堿性蛋白酶和風(fēng)味酶酶解花生蛋白的工藝條件，通過正交旋轉(zhuǎn)組合建立了短肽得率及水解度與各影響因素的回歸模型；結(jié)合實際生產(chǎn)確定了堿性蛋白酶酶解花生蛋白的最佳參數(shù)組合為：溫度為55℃、pH值8.4、底物濃度為4.31％、酶底比為3.39％、水解時間4h。在此條件下，花生多肽得率為74.88％，水解度為23.40％。風(fēng)味酶酶解花生蛋白的最適參數(shù)組合為：溫度

3、59.30℃、pH值7.45、底物濃度為5.60％、酶底比為5.03％、時間2h。在此條件下，花生多肽得率為77.17％，水解度為22.84％。
　　 在堿性蛋白酶和風(fēng)味酶的酶解最適條件下，水解時間分別為15，30，60，90，120，150，180min。然后研究不同水解度水解物的抗氧化活性。研究表明，兩種酶解物都顯示出較強的還原能力、抗氧化能力、清除自由基的能力。且隨著時間的延長，水解度和還原能力、抗氧化能力、清除自由基的能

4、力逐漸增強，堿性蛋白酶水解物抗氧化活性高于風(fēng)味蛋白酶。兩種酶解液的抗氧化活性都隨著濃度的增加而增強，且在一定濃度條件下，堿性蛋白酶酶解液抗氧化活性強于風(fēng)味酶酶解液。
　　 采用截留分子量8K Da、3.5K Da、1K Da的透析袋對花生蛋白酶水解液進行分級分離。不同蛋白酶解物配制相同的濃度，樣品分子量范圍在1K Da以下的多肽混合物的含量分別為堿性蛋白酶和風(fēng)味酶的總水解物的76.21％和83.42％。不同分子量范圍的水解物均具

5、有一定的清除羥基自由基的能力。其清除自由基程度隨分子量的減小而增大。分子量范圍在1K Da以下的組分清除自由基的能力最強。其清除率分別為78.49％和67.83％。堿性蛋白酶水解物小于1K Da組分的自由基的清除率高于風(fēng)味蛋白酶。Tricine-SDS-PAGE電泳圖譜表明，透析袋分級效果明顯，三分級組分在分子量上明顯小于未水解的花生蛋白，且三者的分子量分布呈現(xiàn)遞減趨勢。
　　 經(jīng)過葡聚糖凝膠層析Sephadex G-25、葡聚

6、糖凝膠層析Sephadex G-15分離技術(shù)，從花生蛋白的堿性蛋白酶水解液和風(fēng)味蛋白酶水解液小于1K Da組分中分別分離出了抗氧化活性較高的組分J22和F22，其相應(yīng)的自由基清除率分別為85.16％和76.83％。氨基酸分析表明：J22、F22和花生分離蛋白相比，組成氨基酸種類發(fā)生了變化，花生分離蛋白中含有15種氨基酸，而J22和F22中含有9種氨基酸?；ㄉ蛛x蛋白中未檢測出甘氨酸，而在J22和F22組分中未檢測出谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸