16648.菜籽肽的制備、分離純化及其抗氧化活性研究

1、盧曉會～菜籽肽的制備、分離純化及其抗氧化活性研究摘要本文以高溫菜籽餅粕為原料，采用超聲微波協(xié)同萃取儀提取菜籽蛋白，然后用堿性蛋白酶Protex6L對菜籽蛋白進行可控水解，制備抗氧化菜籽肽，并通過SephadexO15葡聚糖凝膠分離純化菜籽肽，最后對菜籽肽及其各分離組分進行抗氧化性能研究。試驗獲得的主要結(jié)論如下：(1)以高溫菜籽餅粕為原料，以蛋白提取率為指標，采用單因素和響應曲面試驗方法，研究超聲微波協(xié)同提取蛋白的最佳工藝條件。結(jié)果表明：

2、微波功率、pH、提取時間和液料比四個單因素對蛋白提取率的影響極顯著，微波功率和提取時間的交互作用顯著，提取時間和液料比的交互作用顯著；超聲微波協(xié)同提取菜籽蛋白的最佳提取條件：菜籽餅粕為60目，液料比為20：1，超聲波頻率為40KHz、功率為50W，微波功率為80w，pH為12，提取時間為500s，提取3次；蛋白的提取率為9054％，提取時間為8min，比傳統(tǒng)水相萃取法提高779％，提取時間縮短5倍。(2)以水解度和酶解物的抗氧化值為指標

3、，對堿性蛋白酶Protex6L、中性蛋白酶Protex7L、Protamex、Alcalase24L、復合風味蛋白酶Flavourzyme五種蛋白酶進行篩選，然后用最佳蛋白酶水解菜籽蛋白，通過單因素和Doptimal試驗優(yōu)化最佳酶解條件。結(jié)果表明：堿性蛋白酶Protex6L為最佳用酶、加酶量為5430U／ml、pill0、溫度55℃、底物濃度2％、酶解時間2h，在該條件下酶解產(chǎn)物的抗氧化值為3364mmoltrolordl009，水解度

4、為1588％。(3)以水作為洗脫液，用SephadexG15葡聚糖凝膠分離純化多肽，得3個組分(RI、RII、RIII)，經(jīng)高效液相色譜法測定各組分的相對分子質(zhì)量依次約為：365，300，120，通過測定對超氧陰離子自由基、羥自由基、ABTS自由基、DPPH自由基的清除能力以及其還原力五個抗氧化指標來探討菜籽肽及其組分的抗氧化能力。結(jié)果表明：多肽及其組分具有較強的抗氧化活性，組分RIII的抗氧化活性明顯高于組分RI、RII肽，其中對羥自

5、由基清除能力最強，組分RjⅡ的活性甚至高于同濃度的Vc；多肽的抗氧化活性與其相對分子質(zhì)量大小呈反比，相對分子質(zhì)量越小，其抗氧化活性越強，RIII組分的相對分子質(zhì)量最小，抗氧化活性最強。關鍵詞：菜籽餅粕；菜籽蛋白；蛋白酶；多肽；分離純化；抗氧化盧曉會一菜籽肽的制備、分離純化及其抗氧化活性研究werestudiedbymeasuringtheabilityofsuperoxideradiDPPHradicalsandtheirreducin

6、gpowersTheresultsdicals，strongantioxidantactivity，especiallyforscavenginghydroxylradicals，andtheabilityofRIllwashigherthanVc；TheantioxidantactivityofrapeseedpeptideswithmolecularweightwasinverseThesmallerismolecularweigh