南極磷蝦抗氧化肽制備和純化的研究.pdf

1、南極磷蝦是一種高蛋白含量的生物資源，其中的蛋白質(zhì)含量為17.56％，且含有較多不飽和脂肪酸及全部的人體必需氨基酸。近年來，以不同來源的蛋白質(zhì)為原料，研發(fā)功能性多肽產(chǎn)品成為了科研熱點。本課題以南極磷蝦蛋白為實驗材料，通過三種抗氧化活性指標(biāo)評測不同分子量多肽的抗氧化性，并對抗氧化多肽進(jìn)行了分離、純化。旨在增強(qiáng)磷蝦中蛋白的功能性，拓展南極磷蝦資源開發(fā)利用的方向。
　　論文以獲得具有優(yōu)越抗氧化活性多肽為目標(biāo)，首先對南極磷蝦抗氧化多肽的制備

2、條件進(jìn)行了優(yōu)化，其抗氧化性以DPPH.，超氧陰離子，.OH的清除率作為衡量標(biāo)準(zhǔn)。實驗表明：使用胰蛋白酶-中性蛋白酶復(fù)合酶解，時間為6h時得到多肽抗氧化活性最好，其DPPH.、超氧陰離子，.OH的清除率分別為72.7%，11.5%，84.8%。利用超濾膜將南極磷蝦蛋白酶解物分級分離成分子量不同的五個組分，CPH I(>10ku)、CPH II(5ku～10ku)、CPH III(3ku～5ku)、CPH IV(0.5ku～3ku)，CPH

3、 V（<0.5ku)。5～10ku的南極磷蝦多肽抗氧化活性最好。其tricine-SDS-PAGE電泳譜圖上顯示有兩個條帶。
　　采用Sephadex G-50凝膠層析、高效液相，高速逆流等色譜技術(shù)，對所得多肽粗品進(jìn)行進(jìn)一步分離純化。經(jīng)葡聚糖 G-50凝膠層析后，得到4個組分，選取抗氧化活性較好的組分2進(jìn)一步純化。通過分析型HSCCC色譜對分離所用溶劑體系進(jìn)行快速篩選，結(jié)果顯示正丁醇：乙酸：水=4:1:5體系分離效果最佳。采用制備

4、型HSCCC對組分2樣品進(jìn)行分離時，對其主機(jī)轉(zhuǎn)速、循環(huán)水浴溫度、加樣濃度以及流動相的流速等四個參數(shù)進(jìn)行了單因素優(yōu)化，確定最優(yōu)操作條件為：轉(zhuǎn)速900r／min、溫度25℃、加樣濃度25mg/mL、流動相流速1.5mL/min。組分2經(jīng)HSCCC分離得到七個組分，組分P2、P3含量較少，但其超氧陰離子自由基的清除率分別達(dá)到66.68%、70.98%；P5組分含量較多，其清除羥基、DPPH自由基的能力分別達(dá)到61.35%和27.43%。P2、

5、P3和P5組分的氨基酸分析結(jié)果表明，Val、Ile、Met、Tyr、Leu、Glu、Asp、Pro和Phe等氨基酸與南極磷蝦多肽的抗氧化性能有著緊密聯(lián)系，以上氨基酸含量越高，其對應(yīng)的抗氧化性越強(qiáng)。所以多肽的抗氧化活性不僅與分子量有關(guān)聯(lián)，還受到多肽的氨基酸組成，氨基酸含量等因素影響。
　　利用胃蛋白酶-胰酶復(fù)合酶對所得多肽進(jìn)行水解，來模擬其人體自然生理消化過程。純化后的南極磷蝦抗氧化肽經(jīng)過胃蛋白酶和胃蛋白酶-胰蛋白酶-胰凝乳蛋白酶酶