米糟蛋白提取及酶法制備抗氧化活性肽及降血壓活性肽的研究.pdf

1、本文以米糟為原料，采用酶法和堿法、凝膠分離技術(shù)、高效液相色譜分離技術(shù)、質(zhì)譜等手段，研究了提取米糟中蛋白質(zhì)的工藝條件、大米蛋白質(zhì)改性、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)抑制肽和抗氧化活性肽的工藝條件和技術(shù)方法，進(jìn)一步分離和確定了具有高ACE抑制活性短肽的一級(jí)結(jié)構(gòu)，并進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察了米糟蛋白酶解物的降血壓效果。 首先，確定了酶法提取米糟蛋白的最佳提取條件，即酶量1.0％、料液比1∶4、pH=8.0、溫度65℃、時(shí)間7h。在該條件下，蛋白質(zhì)

2、的提取率為62.6％，提取物的蛋白質(zhì)含量為84.0％。堿法提取米糟蛋白質(zhì)的最佳工藝條件為溫度65℃、堿濃度0.8％、時(shí)間6h、料液比1∶6，在該條件下蛋白質(zhì)的提率為76.2％，提取物蛋白質(zhì)含量為80％。酶法及堿法提取米糟蛋白質(zhì)的研究結(jié)果在米糟蛋白提取研究中處于領(lǐng)先水平。 米糟蛋白經(jīng)堿性蛋白酶改性后，其溶解性、乳化性、起泡性等性質(zhì)得到了明顯的改善，在中性條件下，40g/L蛋白酶解物溶液的氮溶解指數(shù)(NSI)、乳化性、起泡性分別達(dá)到

3、了95％、55％、70％。 在本研究中首次對(duì)米糟蛋白的堿性蛋白酶酶解產(chǎn)物進(jìn)行了抗氧化活性的探索，研究結(jié)果表明，米糟蛋白的堿性蛋白酶酶解產(chǎn)物不僅具有還原能力，而且還具有清除DPPH自由基的能力。對(duì)米糟蛋白酶解物、茶多酚、丁基羥基茴香醚(BHA)、Vc進(jìn)行的清除DPPH自由基的能力比較結(jié)果表明，米糟蛋白酶解物清除DPPH自由基能力接近BHA。以還原能力為響應(yīng)值對(duì)酶解反應(yīng)進(jìn)行了響應(yīng)面優(yōu)化研究，結(jié)果表明，酶解法獲得抗氧化活性肽的最佳條件

4、為pH7.74、溫度61.5℃、料液比1∶5.23。 本研究中用蛋白酶酶解的方法從米糟中獲得了血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)抑制活性肽。對(duì)中性蛋白酶、酸性蛋白酶、復(fù)合風(fēng)味蛋白酶、水解蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶酶解物的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)抑制活性比較結(jié)果表明，胰蛋白酶酶解物的ACE抑制活性最強(qiáng)。并以ACE抑制活性為響應(yīng)值對(duì)酶解反應(yīng)進(jìn)行優(yōu)化研究，結(jié)果顯示，最優(yōu)條件為pH8.02、溫度37.0℃、蛋白酶量[E]/[S]=0.75AU

5、、料液比(W/R)為1∶4.13、水解時(shí)間4.0h，在該條件下獲得的酶解物的ACE抑制活性為84.95％。有關(guān)從米糟蛋白中獲得ACE抑制活性肽方面的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。通過(guò)葡聚糖凝膠SephadexG-15分離ACE抑制活性肽獲得了六個(gè)多肽組分即F-Ⅰ、F-Ⅱ、F-Ⅲ、F-Ⅳ、F-Ⅴ、F-Ⅵ，其中組分F-Ⅴ的ACE抑制活性最強(qiáng)，其ACE抑制活性達(dá)到了84.7％，對(duì)F-Ⅴ進(jìn)行的HPLC分析結(jié)果表明，F(xiàn)-Ⅴ中含有4個(gè)組分，其中F-Ⅴ-Ⅳ的含量占

6、93.89％，用RP-HPLC進(jìn)行制備F-Ⅴ-Ⅳ組分后用質(zhì)譜分析方法研究了組分F-Ⅴ-Ⅳ的一個(gè)分子量為645肽的氨基酸一級(jí)結(jié)構(gòu)，結(jié)果表明，氨基酸一級(jí)結(jié)構(gòu)為FNGFY(Phe-Asn-Gly-Phe-Tyr)。 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，一次性給藥實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，ACE抑制活性肽1mg/kg組、10mg/kg組、50mg/kg組及卡托普利(Captopril)1mg/kg組在給藥后1h，原發(fā)性高血壓大白鼠(SHR)血壓分別10.96mmHg、16