L-乳酸產(chǎn)生菌選育及發(fā)酵優(yōu)化.pdf

1、本論文采用紫外誘變和亞硝基胍誘變兩種方法，對出發(fā)菌株米根霉3038進行誘變篩選得到一株高產(chǎn)正突變菌株，優(yōu)化了培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，并對軟質(zhì)聚氨酯泡沫載體固定化米根霉菌絲體發(fā)酵生產(chǎn)L—乳酸進行了研究。 在誘變育種實驗部分，采用溴甲酚綠平板變色圈法篩分出變色圈大的菌株，然后經(jīng)液體試管培養(yǎng)，用紙層析法定性測定產(chǎn)乳酸情況，棄去不產(chǎn)乳酸和產(chǎn)乳酸顯著減少的菌株，將初篩所得菌株進行搖瓶復篩。該初篩方法較準確，且簡便、易操作。 將米根霉30

2、38進行紫外誘變，篩選出產(chǎn)酸量最高的一株正突變菌株，將其命名為米根霉DH—1。然后將米根霉DH—1進行亞硝基胍誘變，篩選出產(chǎn)酸量最高的一株正突變菌株產(chǎn)酸為60．53g/L，比米根霉3038產(chǎn)酸量提高24．36％，將它命名為米根霉DH—1—2。 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件優(yōu)化結(jié)果為：種子培養(yǎng)基碳源濃度為5．00％，氮源濃度為0．25％，種子培養(yǎng)溫度37℃。發(fā)酵培養(yǎng)基碳源濃度為13．00％，氮源濃度為0．20％，金屬離子Fe2+對發(fā)酵產(chǎn)酸影響

3、較大，F(xiàn)eSO4·7H2O濃度為0．04％，接種量10％，一次性添加碳酸鈣5．00％。 本論文采用游離菌絲方式進行種子培養(yǎng)，然后控制發(fā)酵培養(yǎng)基中的軟質(zhì)聚氨酯泡沫載體添加量，形成吸附固定化小菌球與游離菌體自聚集成小球混合發(fā)酵產(chǎn)酸。該方法操作簡便，且避免了菌絲纏結(jié)成大的菌絲團，又發(fā)揮了固定化菌絲發(fā)酵和游離菌絲自聚集形成小菌球體發(fā)酵的雙重優(yōu)點，產(chǎn)酸量得到提高。聚氨酯泡沫載體尺寸大小以2mm3～3mm3為宜。按體積百分數(shù)計，載體的適宜添